马铃薯纺锤块茎病毒遗传多样性及其诱导的基因沉默.pdfVIP

马铃薯纺锤块茎病毒遗传多样性及其诱导的基因沉默.pdf

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马铃薯纺锤块茎病毒遗传多样性及其诱导的基因沉默

J● 一J●●●l ● ’ 目录 ⅢYmiii●l Ⅲ7, Ⅲ8眦7Ⅲ5Ⅲ6Ⅲ7 目 录 目jj毛……………………………………………………………………………………………………………………………….I 摘要……………………………………………………………………………………………………………………………….1 Abstract…………………………………………………………………………………………………………………………..III 1前言…………………………………………………………………………………………………………………………。1 1.1研究目的和意义……………………………………………………………………………1 1.2文献综述……………………………………………………………………………………2 1.2.1类病毒的分类…………………………………………………………………………2 1.2.2类病毒的生物特性……………………………………………………………………6 1.2.3类病毒的复制…………………………………………………………………………7 1.2.4 RNA聚合、切割和连接…………………………………………………………….10 1.2.5类病毒的运输…………………………………………………………………………12 1.2.6类病毒结构与功能的关系…………………………………………………………..15 1.2.7植物中的砌叭沉默…………………………………………………………………17 1.2.8类病毒的致病性与专化的siRNAs…………………………………………………24 2 材料与方法…………………………………………………………………………………一30 2.1试验材料………………………………………………………………………………….30 2.1.1质粒载体和菌株……………………………………………………………………..30 2.1.2植物材料与PSTVd毒源……………………………………………………………。30 2.1.3酶与试剂………………………………………………一…………………………..30 2.1.4引物设计……………………………………………………………………………..30 2.2常用培养基和溶液的配制……………………………………………………………….31 2.2.1细菌常用培养基……………………………………………………………………..31 2.2.2常用溶液的配制………………………………………………………………………3l 2.3实验方法………………………………………………………………………………….32 2.3.1大肠杆菌感受态细胞的制备及热击转化…………………………………………。32 2.3.2农杆菌感受态细胞的制备及电击转化……………………………………………..33 2.3.3 质粒DNA的提取……………………………………………………………………34 2.3.4DNA操作……………………………………………….:…………………………………………………..35 2.3.5类病毒的接种………………………………………………………………………。37 2.3.6农杆菌介导的基因瞬时表达………………………………………………………..38 2.3.7植物组织RNA的提取………………………………………………………………38 2.3.8 Northern Blotting……………………………………………………………………………………………40 3结果与分析……………………………………………………………………………………49 3.1载体构建………………………………………………………………………………….49 3.1.1 含有PSTVd反向插入正链单体叔

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