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主 要 内 容 大肠杆菌在分子生物学实验中的应用 生物工程用菌株优点： ★ 背景清楚：全基因组测序，共有4405个开放阅读框架。由于该菌株遗传背景清楚，并经过一系列突变筛选，使外源DNA在胞内不易发生重组或修饰，更适于作为基因操作的宿主菌。 ★ 生物安全：生物工程用菌株是在不断筛选后被挑选出的，这些菌株由于失去细胞壁的重要组分，在自然条件下无法生长，甚至普通的清洁剂都可以轻易杀灭。即便由于操作不慎导致活菌从实验室流出，也可避免对自然界造成危害。 ★ 菌株基因优化：生物工程用的菌株基因组都被优化过，使之带有不同基因型（例如β半乳糖苷酶缺陷型），可用于分子克隆实验。 ★ 操作简便，表达量高：大肠杆菌操作和培养条件简单，适于大规模发酵。表达的外源基因蛋白量甚至可以达到细菌总蛋白的80%。 目前大肠杆菌是应用最广泛，最成功的表达体系，常做高效表达的首选体系。美国FDA批准为安全的基因工程受体生物。 大肠杆菌在分子生物学实验中的应用 缺点： ★ 基因结构差异：大多数真核基因含有内含子，细菌中没有除去内含子机制，外源基因编码区必须是连续的，删除真核基因的内含子和5’非编码区。 原核：CDNA； 真核：DNA ★ 转录信号不同：真核基因转录的mRNA分子不具有结合细菌核糖体所必须的SD序列 细菌RNA聚合酶不能识别真