浅谈荧光原位杂交技术（FISH）在诊断精子多倍体中的应用研究进展.docVIP

浅谈荧光原位杂交技术（FISH）在诊断精子多倍体中的应用研究进展 　　摘要：近年来，由于FISH 技术具有安全、快速及灵敏度高的特点，在诊断精子多倍体中得到了广泛应用，本文主要对荧光原位杂交技术（FISH）在诊断精子多倍体中的应用研究进展进行综述。 　　关键词：FISH技术 精子 多倍体 　　1、 荧光原位杂交（FISH）技术的概念及原理 　　荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术，以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法，FISH的基本原理是将DNA（或RNA）探针用特殊的核苷酸分子标记，然后将探针直接杂交到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异性结合来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.FISH具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点，不但能显示中期分裂相，还能显示于间期核。 　　2、 异种体外受精技术的限制 　　精子染色体检测方法主要有异种体外受精技术（人精子?仓鼠卵融合技术）制备人精子染色体和精子FISH分析[1，2]。1978年Rudak[3]等采用异种体外授精技术首次制备出人精子染色体标本，此方法可以直接观察到精子全部染色体组成，精确分析染色体结构、数目。但是由于这一技术需要模拟体内精卵结合，以及需要保证体外精子获能的条件和仓鼠的超排卵数等，技术难度大、实验条件要求高，制片成功率低，因此限制了此技术的广泛应用。 　　3、 FISH技术检测非整倍体的优点 　　非整倍体是导致人类胚胎丢失和染色体疾病的主要原因之一，而非整倍体的产生是由于生殖细胞减数分裂过程中的染色体不分离造成的，因此，阐明非整倍体产生的机制具有重要的意义。目前，国内外大部分的研究者都通过收集一定数量质量异常与正常的精液标本，通过应用XY性染色体重复序列探针，对处理后的精子细胞进行荧光原位杂交分析，探讨FISH技术在诊断精子多倍体中的应用，从而建立各自实验室精子FISH分析的技术平台，这种方法有助于患者的遗传咨询、PGD异常胚胎的风险预测及携带者有无PGD必要性的评估。同时可以将本技术向其他部门进行推广。 　　4、 FISH技术研究精子非整体的进展 　　随着荧光原位杂交技术的发展，近年来国内外许多学者运用FISH技术对精子非整体进行研究。在国外，Burrello[4]研究结果发现精子非整倍体升高的ICSI患者与精子非整倍体率正常的ICSI患者比较其妊娠率低、流产率高。Rubio[5]等认为ICSI后自然流产和反复种植失败者是精子染色体异常的高危人群，这类男性患者精子性染色体二倍体率较正常对照组明显升高。在国内，吕静等[6]应用X、Y、18号染色体探针对16例弱精子症患者和8例健康男性进行三色荧光原位杂交，分析精子染色体非整倍体。王喜良等[7]三色荧光原位方法检浏精子非整倍体，发现同正常精液患者相比，严重少精子症患者有显著高的X， Y， 18非整倍体精子。张云山[8]、李练兵等[9]的研究结果也与上述结论类似。 　　同时，越来越多的研究者建立了各自实验室精子FISH技术流程。如马春杰[10]比较普通光学显微镜和倒置相差显微镜观察D1T处理精子核膨胀度的效果，发现倒置相差显微镜能较好地用来观察精子头的膨胀度，镜下精子头膨胀体积的掌控比较容易，从而建立一种高效的原位杂交前人精子核的解聚方法和检测手段。刘浩[11]建立快速稳定的人精子核双色荧光原位杂交的实验方法，用于人性染色体非整倍体率的分析研究。 　　5、 小结 　　非整倍体是导致人类胚胎丢失和染色体疾病的主要原因之一，而非整倍体的产生是由于生殖细胞减数分裂过程中的染色体不分离造成的，FISH技术用于研究精子染色体结构，方法简单，快速、安全、直观、高灵敏度、高特异性，可快速简便地检测精子间期细胞核，1次可以检测成千上万个精子的染色体，为准确分析染色体结构异常患者的减数分裂规律，提供了大样本研究的途径。 　　参考文献： 　　[1] Scriven PN，Handyside AH，Ogilvie CM.Chromosome transloeations：segregation modes and strategies for Preimplantation genetic diagnosis.Prenat Diagn[J].1998，18（13）：1343-1344。 　　[2] Stem C，Pertile M，Norris H，et al.Chromosome translocations in couples with In-vi