唾液酸近氨基端结构域功能及脂多糖对PRRSV诱导IFN-a的影响的研究.pdf

捅要 性传染病。PRRSV在体内主要入侵单核／巨噬细胞，研究表明这与猪肺泡巨噬细胞上的病毒受体密 切相关，唾液酸粘附素受体在PRRSV侵染PAM细胞的过程发挥关键作用。唾液酸粘附素受体胞 外区参与PRRSV与PAM细胞的吸附，本试验通过研究唾液酸粘附素受体近氨基端第一个结构域 自然条件下，猪感染PRRSV后往往继发感染副猪嗜血杆菌等革兰氏阴性细菌病，革兰氏阴性菌在 体内会产生大量的内毒素，内毒素在机体的抗病毒机制中所发挥的作用目前还不明确，通过研究 内毒素在诱导机体抗病毒免疫反应抑制中的作用打下基础。 ． 从健康猪肺收集PAM细胞，提取总RNA，设计1对唾液酸枯附素受体近氨基端第一个结构域 的特异性引物。用RT-PCR方法扩增出其近氨基端的第一个结构域的基因片段，大小约为450bp， 达，获得了分子量大小约为36．6KD的重组蛋白Snl50，与预期的蛋白分子量相符；通过优化表达 条件，大量表达重组蛋白，用尿素法对表达的蛋白进行纯化与复性。用纯化蛋白免疫小鼠，制备 结果显示制备的多抗可以与各自的重组蛋白特异性结合，表明表达的重组蛋白具有较好的免疫原 性。 检测PRRSV的相对荧光定量方法，该方法扩增产物形成单一的特异性溶解峰，扩增特异性较好。 PRRSV，分别培养6h、12h、15h、18h、24h后，收集细胞及上清，用建立的real-timePCR方法检 特异性抗体封闭后试验组PRRSV mRNA mRNA水平在各个时间段比对照组相应时间段的PRRSV 的过程可能存在更复杂的调节机制。 清，用建立的real．timePCR方法检测PAM细胞中的PRRSV mRNA复制拷贝数。结果显示，LPS 平达到项峰的时间推迟，PRRSV 内的增殖。 相对荧光定量方法，该方法扩增产物形成单一的特异性溶解峰，扩增特异性较好。将含200个 PCR方法检测PAM细胞中的IFN-ctmRNA水平。结果显示，与PAM健康细胞对照组相比LPS诱导健 康PAM细胞在不同时间段的IFN-a 刺激的PRRSV感染的PAM细胞相比，IFN．Q转录水平达到顶峰的时间推迟，并且IFN-amRNA水平 毒免疫反应抑制。 关键词：猪繁殖与呼吸系统综合症病毒；唾液酸黏附素；PAM细胞；a干扰素；脂多糖 2 THERESEARCHoFTHE FUNCTIoNoFNEAR N-TERMlNALSTRUCTRALDoMAINoF AND SIALICACID THE oFLPSoN EFFECT IFN．仅GENERATEDFRoMEPAM INFECTEDWITNPRRSV Supervisor：Prof．XiaPing’an Master Candidate：ZhangZhiyuan ABSTRACT：ne and aviral porcinereproductiverespiratory syndrome(PRRS)is infectious iscausedtheinfectionof and disease,whichby porcinereproductiverespiratory syndrome invadesinto