分子生物学研究方法PCR..pptVIP

分子生物学研究方法 毛 泽 斌 一.多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaciton,PCR) （一）原理 （二）。PCR反应的主要成分和作用 1。DNA聚合酶：PCR反应使用的是耐热DNA聚合酶。 比如：Taq DNA聚合酶。 可分为两大类： 二 PCR的应用 （一）未知DNA片断的克隆 1，基因组DNA步移法 2，Inverse PCR * PCR技术在医学中的应用 热变性（94度） 引物 退火（55度） 延伸（72度） DNA聚合酶 dNTP 变性 退火 引物 经25~30次循环， 目的DNA增加166-7 （1）具有校正功能的（有3‘?5’核酸酶活性） 比如：Vent,pfu,pwo等 （2）不具有校正功能的 （无3‘?5’核酸酶活性） 比如：一般的Taq DNA聚合酶 2。引物 （1）引物长度以15~30个bp为宜。引物过短会使特异性降低， 过长时则成本增加，且也会降低特异性。 （2）引物碱基尽可能随机分布，避免出现嘌呤，嘧啶堆积现象， 引物G+C含量宜在45~55%左右。 （3）引物内部不应形成二级结构，两个引物之间尤其在3‘末端不应 有互补链存在。 （4）引物的碱基顺序不应与非扩增区域有同源性。要求在引物设计