1株产丝氨酸羟甲基转移酶菌株的分离鉴定及其培养条件优化.pdfVIP

维普资讯 国冒冒 !里垒 ! !!!!里 ! 1株产丝氨酸羟 甲基转移酶菌株的分离鉴定及其培养条件优化 马立周 ，李江华 ，房 峻 ，宁健飞。，蔡立 明。，曹 钰 ，陆 健 1(~32南大学，工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 ，214122)2(9~锡晶海氨基酸有限公司，江苏 无锡 ，214199) 摘 要 从 甲醇污染土壤 中分离得到1株能在含 2 甲醇的培养基上生长且产丝氨酸羟 甲基转移酶(SHMT)的 菌株，ML206，酶活达到0．030U／mL。将 ML206菌株 的 16SrDNA序列 (No．EF612770)和 GenBank数据库 中 已报道 的16SrDNA序列进行 Blast比对和系统发育分析 ，结合形态学和生理生化鉴定结果 ，确定 ML206为嗜 胺 甲基杆菌(M aniovorans)。经过对产酶条件 的优化确定最佳氮源 、碳源及培养件为 ：(NH )HP 0．8％， CHaOH2 ，pH7．0，温度 3O℃；采用分批的方式添加 甲醇，培养时间由72h缩短至48h，节省 了33 的培养 时间。在优化的培养条件基础上进行实验 ，菌体浓度 比原来提高了5O ，SHMT活力提高了2O 。经过对该茵 的各种特性的研究确定 了其为 1株 良好的产 SHMT的新型出发菌。 关键词 丝氨酸羟 甲基转移酶，系统发育分析 ，嗜胺 甲基杆菌，条件优化 在动 、植物体 内和微生物细胞中，普遍存在着甘 来 ，人们对该菌生长特性 的详细介绍很少 ，更没有其 氨酸和丝氨酸的相互转换。该反应的生理方向是 L一 生产用途和生长条件 的研究报道 。本文介绍 了甲基 丝氨酸断裂成为甘氨酸和N5一N10一亚甲基四氢叶酸 ， 营养型菌 ML206的筛选鉴定、生理生化特性研究、 其中辅酶 四氢叶酸作为 C1基 团的载体n ]，催化该 系统发育分析以及其培养条件的初步优化 。 步反应的酶是丝氨酸羟 甲基转移酶 (serinehydroxy— l 材料和方法 methyltransferase，SHMT)。自从 Sagers和 Gunsa— lus第 1个报道用 Diplococcusglycinophilus菌发酵 1．1 材 料 法生产丝氨酸至今，各国科学家已报道了一定数量的 1．1．1 菌 种 SHMT 产 生 菌 ，包 括 ：Saccharomycescerevisiae， MethylobacteriumaniovorangML206，由本实 Escherichiacoli，Salmonellatyphimurium 和 Ba— 验室在 甲醇污染过的土壤中分离得到。 cillussp．N5等 ]。1982年 由YoshikazuIzumi等 1．1．2 分离培养基 利用休眠菌体通过添加甘氨酸和甲醇积累丝氨酸开 采用 TairoHagishital3]报道的培养基 。定容后 创了生物酶法转化生产丝氨酸 的先河 。酶法与发酵 调 pH 为 7．0，灭菌后添加 1 的甲醇。 法生产 L一丝氨酸相 比有反应过程简单 、副反应少 、生 1．2 菌种的分离筛选 产效率高、产物单一、提取方便 ，具有独特的优势 ，因 1．2．1 菌种分离 此 ，酶法合成 L一丝氨酸成为研究领域 的重点。不管 将若干甲醇污染过的土样溶于生理盐水中，梯度 发酵法还是酶法，丝氨酸最终产量都依赖于 SHMT 稀释 ，涂布平板 ，30~C培养 72h，挑选单菌落接斜面。 的酶活。 将斜面上的菌落接发酵培养基，30~C200r／min摇床 本实验室从 甲醇污染土壤 中分离筛选得到 1株 培养 72