TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒载体的构建及其在人脐带间质干细胞中的表达.pdfVIP

维普资讯 第 18卷第3期 江 苏 大 学 学 报(医学 版) Vol|18 No．3 2008年 5月 Journal ofJiangsuUniversity(MedicineEdition) Mav2008 TNFoL—Tumstatin融合基因腺病毒载体的 构建及其在人脐带间质干细胞 中的表达 周忠海 ，许文荣 ，朱 伟 ，乔 纯 ，王兴忠 ，陈 圆 ， 司煜安 ，徐 静 ，周洪兴 ，张蕾蕾 ，李继刚 ，钱 晖 (1．江苏大学基础医学与医学技术学院，江苏 镇江212013；2中国人民解放军第九七医院中心实验室，江苏 徐州221004) [摘 要] 目的：构建携带绿色荧光蛋白的TNFc~一Tumstatin融合基因腺病毒表达载体，转染人脐带间质干细胞 (hu— manumbilicalcordmesenchymalstemcells，hUCMSCs)。方法：设计含有GM，CSF信号肽序列和 魄伽 【及HindⅢ酶切位 点的引物，PCR扩增TNFc~一Tumstatin，将扩增产物亚克隆到穿梭质粒pAdTrack—CMV上，重组穿梭质粒经P船 I线性化 后转化含有腺病毒骨架质粒pAdEasy．1的BJ5183中同源重组。筛选获得含有融合基因的重组腺病毒质粒，酶切鉴定 并测序。重组病毒质粒用PacI酶切线性化后转染293A细胞 ，经过包装 、扩增后感染hUCMSCs并检测细胞内融合基 因的表达。结果：重组腺病毒质粒经 PCR和PacI酶切鉴定，证实含有TNFc~一Tumstatin融合基因，测序结果和设计片 段的序列一致。重组腺病毒感染的hUCMSCs表达绿色荧光蛋白和融合基因。结论：成功构建了TNFc~-Tumstatin融 合基因的腺病毒表达载体，能高效率感染 hUCMSCs，为进一步研究融合基因修饰的 hUCMSCs抗肿瘤效应奠定了基 础。 [关键词] 腺病毒载体；融合基因；同源重组；细胞转染 [中图分类号] R392．12 [文献标志码] A [文章编号] 1671—7783(2008)03—0185—04 Construction ofadenovirusvectorcarryingTNFoL-Tumstatinfusion gene anditsexpressioninhumanumbilicalcordmesenchymalstem cells ZHOUZhong．hai一，XUWen，rong ，ZHUWei，QIAOChun，WANGXing．zhong，CHENYuan， 5，Yu．an，XUJing ，ZHOUHong．xing，ZHANGLei．1ei，1．1Ji-gang，QIANHui (1．SchoolofMedicalTechnology，JiangsuUniversity，ZhenjiangJiangsu212013；2．DepamnentofCentral[zd~oratory，the97thHospitalof PLA．XuzhouJiangsu221004，China) [Abstract] objective：Toconstructgreenfluorescenceprotein(GFP)labeledrecombinantadenoviurs vectorcarryingTNFot—Tumstatinfusiongene and transfectitintohUCMSCs．M ethods：Theamplification productsofTNFot—TumstatinbyPCRwithapairofprimerswithBgtUandHindm restrictionendonuclease sitesand signalpeptidesequenceofGM ·C·SFweresubclonedintoshuttleplasmidpAdtrack-·CMV afterdi-·