同位素亲和标签（icat）系列技术及其在蛋白质组研究中的应用①.pdfVIP

维普资讯 癌变 。畸变 。突变 2003年 10月第 15卷第 4期 Carcinogenesis，TeratogenesisandMutagenesisVol15No4Oct ． ． 2003 文章编号：1004—616X(2003}04—0244—05 ·综 述 · 同位素亲和标签 (ICAT)系列技术及其在蛋白质组研究中的应用① 荣 举 ，许丽艳 ，李恩民 (1．汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室，2．汕头大学医学院肿瘤病理研究室 ，广东 汕头 515031) 【摘要】近年来，大量的研究结果表明双向电泳技术由于不能对分子量极高或极低 、等电点极酸或极碱和含量低的蛋 白质以及膜 蛋白质等进行有效分离，因此已不能适应 目前蛋白质组研究深入发展的需要。同位素亲和标签 (isotope—codeda侬nitytag，ICAT)技 术是最近发展起来的一种用于蛋白质分离分析的新技术，由于采用了一种全新的化学试剂 一ICAT试剂 ，同时结合了液相色谱和 串联质谱，因此不但明显弥补了双向电泳技术的上述不足，同时还使高通量、自动化蛋白质组分析更趋简单 、准确和快速，代表 着 目前蛋白质组分析技术的主要发展方向。最近针对磷酸化蛋 白分析以及与固相技术相结合 ICAT技术本身又取得 了许多有意 义的进展，已形成 ICAT系列技术。对此本文进行了全面综述。 【关键词】同位素亲和标签；蛋白质组 ；双向电泳；质谱 ；磷酸化蛋白同位素亲和标签试剂；固相同位素标签试剂技术 中图分类号：Q503 文献标识码 ：A 随着人类基因组计划快速 向前推进 ，大部分人类 质的相对含量 …，以判断正常与疾病状态下蛋 白质表 基因组序列已测序完毕，我们所面临的巨大挑战是如 达的变化，寻找疾病的发病机制 。 何解释所获得的大量基因序列信息并加以应用，以进 与基因组学研究相比，蛋 白质组学研究的对象数 一 步从结构、功能和生物学过程调控的角度解释一个 量极大，所 以蛋白质组学要求对复杂混合物中蛋 白质 物种基因序列中所含的信息。因此全面发展了基因组 成分做到快速分离、高通量定量和定性，然而 目前还 在mRNA水平表达情况的测量方法 ，以衡量细胞在某 没有哪个单独的实验或技术平台可以在蛋 白质组范 一 状态下的功能 “ 】，并用于寻找鉴定细胞在某一状 围内做到这点。研究蛋 白质组最常用的方法是通过高 态下的独特型基因。尽管这些方法非常灵敏，但 mR- 分辨率双向聚丙烯酰胺凝胶 电泳分离蛋白质，显色、 NA表达水平高低往往与蛋 白质浓度没有必然相关 取点，再用质谱或串联质谱测序鉴定蛋白质点 】。这 性，且人们发现基因表达和转录不能完全解释细胞的 种方法的缺点是：①仅检测到某一类蛋白质，而不易 生理功能 b】，而一个基因的功能、与其它基因产物及 检测到膜蛋 白、分子量非常大或非常小的蛋 白质、等 其亚细胞结构之间的功能联系，最终都必须通过在蛋 电点极偏酸或极偏碱的蛋 白质；②高丰度蛋 白容易检 白质水平对基因产物的研究才能确定。于是研究人员 测到，但不易检测到含量相对较低 ，在细胞 内对生命 的目光又转向基因产物，细胞功能的执行者一蛋 白 活动起调节作用的蛋白质，如转录因子和蛋白激酶 质，蛋 白质组学因此而生。蛋 白质组学是全面分析和 等；③双向电泳的操作连续性较强，劳动密集，难以实 研究一种细胞或组织的基因组表达的全部相应的蛋 现 自动化 ；④双向电泳的重复性较低；⑤电泳凝胶上 白质，研究蛋 白质之间的相互作用与联系，在蛋 白质 的蛋 白质斑点很大一部分包含一种 以上的蛋 白质，而 水平上对细胞或机体基因表达的整体蛋白质的定量 有时一种蛋 白质经过不同的修饰或处理后在凝胶中 研究，来揭示生命的过程和解释基因表达调控的机 形成不同的斑点，这些情况使定量分析复杂化；⑥双 制，其 中心 目标是系统的鉴定复杂样品所含的蛋 白质 向电泳以依次鉴定单个蛋白质点为基础，限制检测速 或通过 比较不同状态的蛋 白质样品，测定同一种蛋白 度。以上这些缺点，目前已明显限制了定量蛋白质组 ① 收稿 日期 ：2003—03—18；修订 日期 ：2003—04—16 基金项 目：国家 自