人NK%2fT细胞淋巴瘤吉西他滨耐药细胞株的建立和差异基因表达检测.pfg.pdf

摘要 人N到T细胞淋巴瘤吉西他滨耐药细胞株的建立和差异基因 表达检测 研究生：陈新峰 导师：张明智 郑州大学第一附属医院 肿瘤科 河南郑州450052 摘要 背景 Lymphoma，ML)是起源于人类免疫系统细胞及其前 恶性淋巴瘤(Malignant 体细胞的恶性增生性疾病。根据临床病理类型可以分为霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’S lymphoma，NHL)。在恶性 lymphoma，HL)和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s 肿瘤中，我国ML发病率呈逐年上升趋势，非霍奇金淋巴瘤是目前发病率增长 最快的肿瘤，其发病率居全世界第五(女性)或第六(男性)位。已成为严重 威胁着人类健康和生命的一种疾病。 熟B细胞型占56％，成熟T细胞型和NK细胞型占26％，前驱恶性淋巴瘤和霍 奇金淋巴瘤约占5％．13％。排前六的淋巴瘤中NK／T细胞淋巴瘤仅次于弥漫大B 细胞淋巴瘤位于第二，同世界其他地区相比，亚洲尤其是中国发病率高，同其 cell Killer／T 他报道相似。NK／T细胞淋巴瘤(Natural lymphoma)是非霍奇金淋巴 瘤的一个亚型，发病率居T细胞淋巴瘤的首位，中国发病率远高于西方国家。 该病具有起病隐匿、早期诊断困难、高度侵袭性、进展速度快、生存期短、预 后较差等特点，早期采用放化疗，中晚期主要是采用化疗为主的综合治疗。目 前国际上对于NKfr细胞淋巴瘤尚无标准的治疗方案，因此寻找高效低毒且不易 产生耐药的化疗药物势在必行。大量的临床研究证明，以吉西他滨为主的化疗 方案对非霍奇金淋巴瘤的疗效确切。同时我们的前期研究通过常规化疗药物敏 摘要 感试验发现NK厂r淋巴瘤细胞株SNK．6、YTS对吉西他滨高度敏感，吉西他滨 有可能成为有效治疗Nl沂细胞淋巴瘤的药物，但Nl叩细胞淋巴瘤细胞对化疗 药物多药耐药是影响化疗疗效的主要因素，NK／T细胞淋巴瘤患者原发或继发耐 药一直困扰着临床医生，于是本课题选择采用体外药物浓度梯度递增法建立 NK厂r细胞淋巴瘤吉西他滨耐药细胞株YTS．Gem，为进一步研究NK／T细胞淋巴 瘤的发生发展和耐药产生机制提供了理想的模型，同时本课题发现的基因表达 差异，为N妍细胞淋巴瘤的基础和临床研究提供了重要的研究线索。 目的 异，探讨N列T细胞淋巴瘤耐药机制。 方法 应用体外细胞培养技术对Y，rS细胞进行体外培养，采用吉西他滨体外浓度 梯度递增法建立可以稳定传代的YTS．Gem。光镜观察形态学变化、M1q法分析 耐药指数、绘制生长曲线、计算倍增时间以及流式细胞仪分析YTS、YrS．Gem 的细胞周期分布及表面标记物；采用荧光实时定量PCR(Real．timePCR)检测 细胞周期相关基因C硒p弱e，细胞凋亡相关基因p53、肿瘤坏死因子相关的凋亡 因脱氧胞苷激酶(dCK)和脱氧胞苷脱氨酶dCDA，耐药相关基因多药耐药基因1 YTS和YTS．Gem的基因表达差异。 结果 同源。 II 摘要 2与YTS相比，具有不同的生物学特性：YTS和YTS．Gem对吉西他滨的 期细胞比例减少、S期细胞比例增多、GMM期细胞无明显变化，组间比较差异 有统计学意义(P0．01)。 3Real．time 差异(P0．05)。 结论 1成功建立了人NK厂r细胞淋巴瘤耐药细胞株YTS．Gem。 2YTS．Gem具有不同于正常NK厂r细胞淋巴瘤细胞株YTS的生物学特征，两 者之间有广泛的差异表达基因，包括细胞周期相关基因、细胞凋亡相关基因、 合成和修复相关基因、细胞代谢相关基因以及耐药相关基因。 关键词： 人NK／T