应用蛋白质组学方法筛选胰腺干细胞标记物_杨明.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 ,2006,33(6):540~547 ProgressinBiochemistryandBiophysics 应用蛋白质组学的方法筛选胰腺干细胞标记物* 1) 1)** 1) 2) 2) 2) 杨 明 王春友 刘 涛 汪 洋 刘 炜 黎明涛 1) (华中科技大学同济医学院附属协和医院胰腺外科中心，武汉430022； 2)中山大学医学院蛋白质组学实验室，广州510089) 摘要 探索利用蛋白质组学的方法筛选胰腺干细胞的标记物.通过大鼠胰腺大部分切除 (Px)的方法建立胰腺增生模型，采用 双向电泳 (2DE)分离比较Px术后第3天大鼠增生胰腺组织与假手术 (Sx)非增生胰腺组织蛋白质的表达谱差异，用基质辅助 激光解吸离子化飞行时间质谱 (MALDI-TOF-MS)和肽质量指纹图谱 (PMF)的方法对差异蛋白进行鉴定，进一步经生物信息 学检索，筛选与胚胎发育和细胞分化相关的蛋白质分子.蛋白质印迹分析蛋白质HSP47、Vimentin在Px大鼠胰腺组织中的表 达，以验证2DE的结果.2DE显示Sx和Px大鼠胰腺组织平均蛋白质点数分别为 (1369 31)和 (1315 28)个，其中共有91 ± ± 个蛋白质点出现 1.5倍以上的表达差异.所有差异蛋白质点PMF鉴定出53种蛋白质，其中Vimentin，cytokeratin8(CK8)， L L lymphocytecytosolicprotein1(-plastin)，heterogeneousnuclearribonucleoproteinA2/B1(hnRNPA2/B1)和 -arginine:glycine 与胚胎发育和细胞分化有关，这些蛋白质可能是胰腺干细胞潜在的候选标记物.总之，蛋白质组学 amidinotransferase(AGAT) 的方法利用其高通量的特点能有效发现潜在的胰腺干细胞生物学标记物. 关键词 蛋白质组学，胰腺干细胞，胰腺增生，分子标记物，Vimentin 学科分类号 Q26 糖尿病发病是因为有功能的胰腺 细胞的数 胰腺组织蛋白质，与假手术 (Sx)非增生大鼠胰腺 β 量相对或绝对不足，通过 细胞替代的方法可以 组织进行差异蛋白质组学分析，初步筛选与胚胎发 β 补充 细胞的数量而治疗糖尿病.胰岛移植因供体 育和细胞分化相关的蛋白质作为潜在的胰腺干细胞 β 来源困难使得其在临床应用受到限制，另外 细 标记物，为下一步研究提供实验基础. β 胞作为一种终末分化细胞其在人体内的增殖能力非 1 材料和方法 常有限，所以胰腺干细胞作为获取足量 细胞的 β 潜在“种子”细胞，成为研究的热点.但是目前尚 1.1 材料 未明确什么是真正的胰腺干细胞，关键是因为还不 1.1.1动物.SPF级雄性Wistar大鼠(150～160g)共 [1] 24只(购自中山大学医学院动物实验中心)，随机分 能确定胰腺干细胞的特异性表面标记 .研究发现， 成年大鼠胰腺大部分 (约90%)切除 (Px)后，确实 成手术组(Px)和假手术组(Sx)(每组 12只)，22℃环 出现有胰腺增生，并且在增生早期发现有几种胚胎 境中喂养，光线充足，饮水不限，食物定量. 期胰腺发育起调节作用的因子(PDX-1、NGN3等) 1.1.2 试剂.蛋白质定量