维甲酸受体α在全反式维甲酸调节血管平滑肌细胞KLF4表达中的作用和机制研究.pdf

中文摘要 摘 要 肺癌是恶性程度最高的癌症之一，其中非小细胞肺癌占所有病例的 75．80％。尽管肺癌的诊断和治疗策略不断涌现，其五年生存率仍只有8— 14％。肺癌的早期转移特性以及临床缺乏遏制肺癌转移的有效策略，是造 成肺癌生存率偏低的主要原因。因此，对非小细胞肺癌转移机制的研究将 有利于肺癌的早期诊断和治疗，提高癌症病人的生存率以及生存质量。 肿瘤细胞的迁移是癌症侵袭和转移的必要步骤。据报道，广泛存在的 第二信使钙离子在细胞迁移中发挥重要作用，但由于其作用机制复杂，迄 今对其在细胞迁移中的作用和机制并不完全清楚。细胞的迁移依赖细胞外 钙离子的内流，因此，细胞膜参与钙离子内流的离子通道将成为研究的重 点。TRP通道是非选择性阳离子通道，在各种兴奋性以及非兴奋性细胞参 与钙离子的内流。近期研究显示TRP通道参与肿瘤细胞迁移。TRP通道包 是一个广泛存在的对多种一价和二价阳离子有通透作用的具有通道和激 细胞以及胚胎肺成纤维细胞的增殖和迁移，也参与鼻咽癌细胞5—8F的迁 移。根据以上研究成果，我们提出假设：TRPM7可能在肺腺癌细胞的迁 移中发挥重要作用。 EGFR在很多癌症细胞中表达增加，并被认为在肿瘤的侵袭和迁移中 是肺癌的治疗，并取得较好的治疗效果。TRPM7是否为EGFR的靶点参与 肿瘤的侵袭和迁移?迄今为止尚无相关研究。本研究采用电生理、分子生 物学和免疫荧光技术证实了TI冲M7在A549细胞的功能性表达，并提示 TRPM7可能作为EGF调节的下游信号分子参与肿瘤细胞的迁移。我们的 研究将进一步完善肿瘤细胞迁移的机制，为临床肺腺癌的治疗提供新的靶 点。 中文摘要 第一部分TRPM7在肺腺癌细胞的功能性表达 目的：(1)研究TRPM7在肺腺癌细胞和组织中的表达及生物物理学、 药理学特征。 方法：本研究采用RT-PCR、Westernblot、免疫组化、免疫细胞化学 和激光扫描共聚焦显微镜技术验证TRPM7在A549细胞和肺腺癌组织的 mRNA和蛋白表达。利用全细胞膜片钳技术检测A549细胞电流特性。全 细胞电流记录采用．120mV至lJ+120 mV的ramp电压刺激程序。利用 是否含有TRPM7电流成份。并进一步采用不同浓度钙离子和镁离子的细 胞外液研究细胞外二价阳离子对TRPM7电流的调节作用。 结果： 1 A549细胞类TRPM7电流的生物物理学特性 我们首先采用全细胞膜片钳技术研究A549细胞的全细胞电流特征。 mV至lJ+120mV的电压刺激程序。在 记录采用无M92+电极内液，从．120 细胞外钙离子存在的情况下，记录到的电流表现为具有显著外向整流特性 的较大外向电流以及较小的内向电流。外向电流在细胞破膜后，逐渐增加， 十分钟达稳定状态。此电流的电流．电压关系与异源表达的TRPM7电流相 似。移除细胞外钙离子可诱发强大的具有内向整流特性的内向电流。统计 mM Ca2+时，．100 结果显示：当细胞外液含有1 mV电压下内向电流密度 为2．45±1．67 mV电压下，外向电流密度为42．25±14．09 pA／pF；+100 mV电压下，外向电流密度为7．07±3．14 pA／pF；+50 pA／pF。当去除细胞 外液的钙离子后，此内源性电流特性发生显著变化：内向电流增大，且表 现出明显内向整流特性。．100mV电压下，内向电流密度是23．54±9．06 mM pA／pF，与其在含1Ca2+细胞外液时电流密度相比增大约9倍；+100 mV电压下外向电流的电流幅度变化不大，电流密度是41．38±16．93 mM +50n1V pA／pF，与其