花生中SOS基因家族的克隆和抗逆性分析.pdf

摘要 摘要 花生是世界上分布最广、种植面积最大的油料作物，种植总面积和总产量均为各种 作物之首。土壤盐渍化严重影响了农作物的产量和农业生产的发展，对植物尤其是农作 物进行耐盐、耐早的改良势在必行。传统的遗传育种难以打破种间隔离的限制，而借助 于基因工程技术，通过转基因可解决这一问题。已知SOS基因家族及其信号转导途径 在植物抗盐及耐盐过程巾具有重要作用。本研究从花生(Arachis L．)中成功 hypogaea 因片段，并对其表达模式进行分析，在此基础上对部分基因的功能及抗盐能力通过离体 测定结合转基因水稻抗盐性分析进行了初步研究。本论文是对花生中SOS基因家族及 其生物学功能的首次报道。主要研究结果如下： (1)花生中SOS基因家族成员的分离及表达特性分析 本研究以花生“鲁花14”为实验材料，结合RACE的方法，从花生叶片中分离到 AhSOS2基因长为1462341 bp、包含1 氨基酸，属于丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。AhSOS3基因包括651bp的开放阅读框，编码 的预测信息存在一定误差，故只获得该基因的部分片段。对SOS基因家族中基因表达 表达，且经250mmolL。1 NaCl和30％PEG．6000模拟干旱处理后， 和AhSOS3基因在花生的根、茎、叶中表达量均有不同程度的上调。显示SOS基因家族 成员表达受盐胁迫及干旱诱导，推测该家族成员在花生抗盐、抗旱及其他抗逆过程中可 能具有一定作用。 (2)花生AhSOS2和AhSOS3基因原核表达载体的构建及蛋白表达 中进行表达。经1．0mmol kDa的融合蛋白条带。且基 约51kDa的融合蛋白条带，而AhSOS3基因编码一条约25 因的蛋白表达产物在25。C下，随着IPTG诱导时间的延长而表达量逐渐提高，经诱导6 h和8 可在原核表达系统中进行表达，且随诱导条件的优化，所表达的蛋白量有所提高。该结 万方数据 摘要 果为进一步在蛋白水平上研究基因的特性及功能奠定了基础。 (3)花生AhSOS2和AhSOS3基因功能的体外及体内验证 离体条件下，通过对彳五SD舵基因在不同盐浓度平板上的生长实验及菌液培养中原 核菌株巾的生长曲线测定，结果显示，在250mmolL。1高盐胁迫下，含有重组质粒的大 肠杆菌比含有空载体的菌株生长速度快，经培养12h后，AhSOS2基因菌液生长状态及 菌液浓度均好于仪含有空载体的菌株的菌液，而含有AhSOS3基因的菌株的生长及菌液 浓度也好于仅含有空载体的菌株，且在菌株培养18h后差别最明显，显示转入SOS家 族相关基因后，菌株具有了一定的抗盐功能。 因水稻为材料对基因的生理功能及抗性进行了初步研究。目前，己获得AhSOS2转基因 行NaCl处理后、叶中的Na+、K+含量测定结果显示。随着处理浓度的提高，对照与转 基因植株中Na+含量逐渐上升，但转基因水稻中Na+含量相对较低，而K+含量变化恰好 相反。盐处理后对植株抗过氧化能力进行测定，随着高盐浓度的提高，对照植株中显示 氧化胁迫的红褐色斑点明显多于转基因植株。显示AhSOS2基因在维持植物体内离子稳 态以及抗氧化胁迫中可能具有一定的作用。综上显示，AhSOS2转基因水稻在盐胁迫下 的生长及表型、含水量及离子含量等方面，均好于对照材料，AhSOS2转基因水稻具有 一定的抗盐性，初步证明该基因对提高植物抗盐及耐盐性具有一定作用。 物学功能 万方数据 Abstract Abstract oneofthemost and in Peanut似rachisL．)is hypogaea importantwidelyplantedcroups theword．Saltstressisanabiot