三叶委陵菜中黄类化合物成分的研究.pdfVIP

摘要 三子叶植物纲原始花被亚纲委陵菜属植物三叶委陵菜(Protentilla freyniana Bomm)或是其变种中华三叶委陵菜为多年生草本植物，分布于华东，华中，西 南地区的山坡草地，具有清热解毒之功效，民间以其根茎或全草入药。但遗憾的 是迄今为止三叶委陵菜尚未被作为一种中药材为中国药典(2000年)或各地地 方标准所收录，亦少见国内外对其化学成分以及生物活性的研究报道。本文研究 了微波辅助提取三叶委陵菜的方法和工艺，大孔吸附树脂分离纯化三叶委陵菜中 黄酮类化合物的最佳条件，采用高效液相色谱一质谱仪分析了三叶委陵菜中黄酮 类化合物的成分和含量，从五个方面测定了三叶委陵菜中黄酮类化合物的抗氧化 性和清除自由基的能力。 课题对三叶委陵菜的研究包括四个部分： (1)研究了三叶委陵菜中黄酮类物质的微波提取工艺，采用微波辅助水蒸气 蒸馏法提取三叶委陵菜黄酮，单因素试验考察乙醇浓度、微波功率、提取时间、 回流温度、料液比对三叶委陵菜黄酮提取率的影响，确定了微波萃取仪提取三叶 委陵菜黄酮的最佳工艺条件为：以75％乙醇作溶剂，在料液比为1：25，温度70C， 功率400W的条件下微波提取5min，效果最好，提取率为4．24％。 (2)以三叶委陵菜黄酮的吸附率、解析率为指标，考察了六种大孔吸附树脂 对三叶委陵菜中总黄酮的分离纯化性能，筛选出最佳的大孔吸附树脂，同时采用 高效液相色谱法进行分析检测表征了分离纯化的效果；分析了原液浓度、pH和 树脂用量以及洗脱剂浓度和pH对吸附解析的影响。实验结果表明，大孔吸附树脂 D101对三叶委陵菜总黄酮有很好的吸附和解析性能，并确定了合适的吸附解析 平衡浓度达0．36 mg／mL时，即树脂已达到吸附饱和，饱和吸附量为49．1mg／g干树 脂；洗脱剂乙醇浓度为50％，pH=6。 (3)利用了高效液相色谱．串联质谱分析法来分析并测定三叶委陵菜黄酮中的 生物活性物质的成分和含量，最终确定了7种主要成分，它们分别是表儿茶素， 二苯乙烯苷，牡荆素，金丝桃苷，芦丁，淫羊藿苷和斛皮苷，同时利用外标法确 27．10mg／g和144．52mg／g；同时根据相关文献信息推断出了两种成分，其分别为 橙皮苷和槲皮素．3．芸香糖鼠李糖苷。 (4)从总体抗氧化能力、对Fe2+诱发卵黄脂蛋白PUFA过氧化体系的抑制能 力、清除羟基自由基能力、清除超氧阴离子自由基能力、清除DPPH自由基能力 五个方面评价了四种委陵菜中黄酮类化合物的活性，并与其他的合成抗氧化剂 Vc和PG进行了比较。实验结果表明，在一定浓度范围内，四种委陵菜中黄酮 类化合物在上述前四个方面的性能有着固定的顺序：三叶(福建)三叶(河北) 西南(河北)谣南(福建)，但在清除DPPH自由基方面稍有不同；与合成抗氧 化剂Ve和PG相比其清除DPPH自由基的能力基本相同。 关键词：三叶委陵菜；黄酮；微波辅助水蒸气蒸馏法；分离纯化；气相色谱．质 谱联用；抗氧化性；自由基清除 ABSTRACT Protentilla Bommis onthe freyniana and perennialherbs，locatedgrasslands mountainofEast China and slopes China，central and Southwest，with cleating thefolk its rhizomeorherbintomedicine．But detox