农杆菌介导的籼高效转化系统的建立和高产抗病基因共转化研究.pdfVIP

羧疆莠 农轻蘩奔警瓣麓疆蹇效转纯系绫戆建立窝共转纯磷寒—』 农杆菌介导的籼稻高效转化系统的建立 和高产抗病基因共转化研究 摘要：承稻楚整赛上三丈主鬻粮食手#戆之一，甏楚凌基兹主要靛食彳毒秘。多年 来，弯耱家一蠢致力承稻懿蕊矮、毫产、菠经弯耱磷究。近冗年，夔蘩援豹基邃 工程的发鬣鞫基因克隆技术为窳现转基因育种开褥了一条新途径。 籼稻怒栽培水稻的主要品种类型。在世界水稻生产上，籼稻面积约占水稻总 面积的80％。但是，与粳稻相比，大量籼稻品种鼹有不良的组培特性和低转化效 率。这种现状严重限制了转基麟技术在籼稻育种上的应用。所以，建立籼稻组培 的葛效再嫩系统帮多个蟊妁基辫豹嗣步转纯技术，辫子培育抗癌、离产、饯矮粒 繇瑟瑟静嚣褥卡分鍪要。 和R507)为研究对象，建立籼稻高效组培系统，并从中筛选出优质杂交籼稻新组 合丰优香占的亲本R6547，作为建立实用籼稻高效缀培系统的研究对象；进而通过 向R6547同时导入T4溶菌酶麓豳(广谱性抗真菌瘸害基因，三弦)和懋磷酸化酶 基因(商产纂爨，助)，磅究农释蘑双墓系共转识鹣效率。主要绩果撩戆熬下； (1)提藤籀稻缀培帮转纯效攀靛研究：在糙稻缀壕串，添拥lm簖。A黔A的ec 培养基比鞍通用于大多数籼稻品种；对难组培的籼稻晶种而言，外植体的来源尤 为重要，以幼胚为外植体，出愈率比成熟胚大大提简；但对于组培特憾较好的品 种，则外植体的影响不明显。谯基培养基上添加lmb¨M液体培养基和～定强度 豹渗透处理(如于燥处理)，蠢璇予提高转纯率。耀农杼蔻不同菌株嚣}酞105和 ￡BA瓣秘分翅逶霞转往，转魏效攀浚存显著差冥。 (2)釉稻黼种R6547的离教缀培和转化系统的建纛：通过综合应用优化的釉稻 的独立再生横株。通过PcR检测166个独立再生槭株，共获得140个阳性植株， 阳性率达到84．3％。 (3)农榉麓双蘩系共转俄敲效攀：缀多掇遂攒爨，在农努蓥戆攀令滚薏转讫潼 嚣下，簸瞧德撩串嚣翡萋毽瓣箨在黻鼙拷燹受主。遽建农秆蒎赍导懿转健方法优 于基因枪方法的重要证据之一。但同时也暗示着农秆菌双菌系共转他可能比基医 枪共转化的效翠低。在我们的椒杆菌双菌系共转化窳验中，获得了140株R6547 独立来源的阳性植株，其中转入T4溶菌酶基因的谢66株，转入焦磷黢化酶基因 的有58株，同对转入T4溶甍瓣蒸毽帮焦磷酸化酶熬嚣的共转化挺株肖16个，2 个萋因垂冬攀耱晓效率分裂为49．毒％翻艇。繇，瑟共转恁频率为9。6％。这今结要显 著低予两令猿藏转纯事{牟筠乘羧(49．4％x4毒．艿％。22．03％)。 扬州大学硕士论文 2 (4)对转T4溶菌酶基因的植株进行Sounlem杂交，结果表明外源基因已整合 迸转化植株的基因组，插入的拷贝数以1个为主。对转化子To代试管无往系进行 田间纹枯病菌接种试验，初步结果表明，部分转化子上病害发展的程度极显著地 低于阴性对照，但也有少数转化子的病害重于对照。 (5)对转焦磷酸化酶基因的植株进行了wjstcm杂交，绝大多数转化子的外源 基因的蛋白能表达，少量PCR阳性植株没有蛋白质表达的原因可能是由于插入的 位置效应或基因的沉默所致。 讨论了建立高产籼稻品种高效组培体系的意义和方法，以及提高农杆菌介导 的共转化效率的可能性和方法等问题。 关键词：籼稻；组织培养；农杆菌介导法；共转化；转化子 张亚芳 农杆菌介导的籼稻高效转化系统的建立和共转化研究—j ———___————____-____●--_———-——_-●-_———‘-__-___-___h——，_———————_-———。————————————————————— A e箍ciellt彳罟加6口c五日rf“m—mediated highly Indicariceandits of transfbmlation appiication system in of铆o co一订aIlsfonnation