拟南芥myb转因子atmyb50与atmyb61互作及其在调控铅耐受性中的作用.pdfVIP

2 3 致 谢 白驹过隙，三年时光恍然而过。我在这里收获了很多很多，得到了很多老师和同 学的热情帮助，首先我要郑重的向曹树青老师表示感谢，在这三年时间里，从论文的 选题，到实验思路的指导，直至如今的论文定稿，曹老师为此付出了极大的心血，万 分的感谢老师的谆谆教诲。感谢刘永胜院长给我们提供的先进的实验室环境，让我们 的实验得以顺利地进行。还有您渊博的学识，给了我们很大的启发。非常感谢刘院长 为我们提供的优秀的科研平台。 当然还必须感谢我们情同手足的阳立波老师，和事无巨细的张惠莹师姐，你们的 到来极大的提高了我的科研水平，大大拓宽了我的视野，你们的严谨的科研精神让我 无比的敬佩，如果没有你们，这篇论文的成色将大打折扣。已经毕业的吕申超超哥和 王敏师兄，感谢你把我从一个对分子生物学知之甚少的本科生带入了分子生物研究的 门槛。鱼斌、李维平、靳光远你们是我的益友更是良师，希望你们以后的科研道路一 帆风顺。程丹、李娜、柏小娅，同窗三年你们给了我极大的帮助。还有实验室的师弟 师妹们，谢谢你们在实验给我的帮助，没有你们的帮助我的实验会一团乱麻。 硕士研究生的生活就要结束了。实验室的工作和生活，让我不仅磨练了专业知识 和实验技能，更重要的是拓宽了视野，培养独立分析和解决问题的能力，这将让我一 生受用。这里所有的欢笑泪水都将成为一段永恒的记忆。 三年来我的父母对我生活上的支持与精神上的鼓励是我最强大的动力。没有我的 家人强力的支持，就没有今天的这份成果。感谢所有亲人对我学业的支持和帮助。 作者：杜李继 二〇一三年四月十三日 4 拟南芥MYB转录因子AtMYB50与AtMYB61互 作及其在调控铅耐受性中的作用 摘 要 食品安全是食品行业的重中之重，而重金属污染是威胁食品安全的主要因素之 一。土壤污染重金属可通过植物吸收进入食物链进而对人类的健康造成了极大的威 胁。因此，利用转基因技术降低农作物对土壤污染重金属的积累具有重要的理论意义 和实践价值，而此项工作的重点在于对植物耐受重金属毒害及其积累的分子调控 机理的认识。 在前期研究中，我们发现两个涉及植物对铅（Pb）胁迫耐受的调控基因AtMYB50 和AtMYB61。这两个基因是MYB转录因子家族中的R2R3亚类成员，具有非常近的亲缘关 系。初步研究表明，AtMYB50和AtMYB61基因可能通过负调节一个编码Pb特异性离子泵 的基因AtPDR12转录进而控制Pb的积累来调节Pb胁迫的耐受性。因此，我们推测： AtMYB50和AtMYB61对Pb胁迫耐受的调节是否形成异源二聚体直接调控下游靶基因 AtPDR12转录。本研究主要研究结果如下： （1） 利用酵母双杂交技术对AtMYB50和AtMYB61蛋白是否具有相互作用进行研究： 构建了pEG202-AtMYB50、pJG4-5-AtMYB50、pEG202-AtMYB61、pJG4-5-AtMYB61 四个酵母双杂载体。在AtMYB50作为诱饵蛋白AtMYB61为靶蛋白和AtMYB61作为诱 饵蛋白AtMYB50为靶蛋白的情况下都检测到报告基因的表达，证实了AtMYB50和 AtMYB61两者存在相互作用。 （2） 在酵母双杂系统中，AtMYB50和AtMYB61两个蛋白作为转录因子没有激活下游 报告基因，表明AtMYB50和AtMYB61可能是转录抑制因子。 （3） 为进一步验证两者之间的相互作用，我们还构建了AtMYB50和AtMYB61的原核 表达载体，并进行表达获得了AtMYB50和AtMYB61融合蛋白，为进一步利用