泥鳅多糖的免疫节和抗肿瘤作用机理.pdf

摘摘 要要 摘摘 要要 泥鳅 Misgurnus angillicaudatus Cantor 是我国重要的名优经济鱼类 属鳅科动 物 全体和皮肤分泌的滑液可以入药 其药用功效收载于 中药大词典 其主要功 效为补脾益气 消热解毒 消痞散结 祛湿邪 治消渴 水肿黄疸 痢疾 阳痿等 症 民间常用其粘液治痈肿 中耳炎 用活泥鳅捣碎外敷治疗乳癌 骨髓炎等 近 代用泥鳅散治疗传染性肝炎 效果显著 我们课题组从泥鳅粘液中分离纯化得到一 种泥鳅多糖 对它的结构特征 生物活性如抗肿瘤活性 免疫作用等进行了研究 但其机理不清楚 本文在细胞水平上对泥鳅多糖的免疫调节和抗肿瘤作用的机理进 行了研究 主要结果如下 1 从小鼠中分离得到脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞 研究了泥鳅多糖对小鼠 淋巴细胞和巨噬细胞增殖活性的影响 研究发现泥鳅多糖可以促进小鼠脾脏淋巴细 胞和巨噬细胞的增殖 同时发现泥鳅多糖的最佳作用剂量为30μg/ml 进一步对脾脏 T B T 淋巴细胞的 淋巴细胞群和 淋巴细胞群研究发现 泥鳅多糖促进 淋巴细胞群的 B RT PCR 增殖 而对 淋巴细胞群几乎没有影响 应用 技术进一步研究了泥鳅多糖 T IL 2 IL 4 IL 6 IFN γ 结果发现泥 对 淋巴细胞分泌的细胞因子 和 的影响 T Th1 鳅多糖作用的靶细胞中主要是 细胞的 细胞亚群 泥鳅多糖可以提高巨噬细胞 分泌的细胞因子IL 6 和TNF α 的表达水平 促进iNOS 的mRNA 表达水平 提 高的iNOS 进而诱导细胞产生NO 这些结果说明泥鳅多糖能提高免疫细胞的免疫调 节作用 T B 并且作用的靶细胞是 淋巴细胞和巨噬细胞 而对 淋巴细胞没有影响 2 为了研究泥鳅多糖的抗肿瘤活性 研究了泥鳅多糖对两种肿瘤细胞株人早幼 粒性白血病细胞株HL 60 和人肝癌细胞株 SMMC 7721 的作用 应用MTT 法及 检测乳酸脱氢酶漏出率的方法研究泥鳅多糖对肿瘤细胞增殖活性的影响 结果发现 泥鳅多糖可以抑制肿瘤细胞HL 60 和SMMC 7721 细胞的增殖 细胞形态学观测 泥鳅多糖可以诱导细胞出现凋亡的形态学特征 提取泥鳅多糖处理的细胞DNA 琼 脂糖凝胶电泳结果发现细胞内DNA 出现DAN Ladder 流式细胞术检测发现泥鳅多 I 糖可以诱导肿瘤细胞出现亚二倍体的凋亡峰 并且呈现出一定的浓度和时间依赖关 系 这些结果说明泥鳅多糖可以诱导肿瘤细胞发生凋亡 泥鳅多糖抑制肿瘤细胞的 增殖主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡所导致的 3 为了确定泥鳅多糖诱导肿瘤细胞的凋亡机理 以人肝癌细胞 SMMC 7721 为对象 研究了泥鳅多糖对细胞线粒体的作用 先后应用DCFH DA 荧光探针检测 泥鳅多糖对细胞活性氧的产生 应用钙离子荧光探针Fura