1型鸭圆环病毒接elisa方法的建立及流行病学调查.pdf

符号说明 目录 中文摘要……………………………………………………I ABSTRAcT…………………………………………………．．II 1前言……………………………………………………．1 1．1猪圆环病毒(PORCINE 1．1．1病原学特征……………………………………………．2 1．1．2病毒的分子生物学特征……………………………………3 1．1．3流行病学特征…………………………………………．．5 1．1．4 PCV2的致病机理………………………………………．．6 1．1．5诊断方法………………………………………………7 1．1．6 PCV的预防控制…………………………………………9 INFECTIONANAEMIA 1．2鸡传染性贫血病毒(CHICKEN VIRUS，CAV)……………10 1．2．1病原学…………………………………一…………．．10 1。2．2流行病学……………………………………………．．14 1．2．3检测方法……………………………………………．．16 】．2．4预防控制……………………………………………．．17 1．3鸭圆环病毒(DUCK 1．3．1病原学特征…………………………………………．．19 1．3．2分子生物学特征………………………………………．．20 1．3．3流行病学特征…………………………………………．22 1．3．4诊断方法……………………………………………．．22 1．4本研究的目的与意义………………………………………24 2材料和方法………………………………………………．25 2．1．1菌种和质粒…………………………………………．．25 2．1．2主要试剂和仪器………………………………………．25 2．1．4用于蛋白纯化的溶液的配制………………………………26 2。l，5ELtSA所用溶液………………………………………．26 2．1．6引物设计与合成………………………………………．27 2．1．7LJ07株Cap基因原核表达载体的构建………………………27 2．1．8SDS—PAGE……………………………………………．27 2．1．9重组质粒在大肠丰T菌中的诱导表达和WesternBlot分析………．．28 2．1．10重组蛋白的变、复性及其纯化……………………………28 2．1．11间接ELISA条件的优化…………………………………29 2．1．12间接ELISA的操作程序和结果判定………………………．．30 2．1．13进行Westernblot符合率的验证………………………．．30 2．1．14间接ELISA方法的初步应用……………………………．．30 2．22011年山东部分地区肉鸭鸭群基因2型DuCV血清学调查…………．．31 2．2．1血清、菌种、质粒及主要试剂……………………………．．31 2．2．2重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达和WesternBlot分析…………3l 2．2．3重组蛋白的变性、复性及其纯化……………………………3l 2．2．4iELISA检测…………………………………………．．3l 3结果与分析………………………………………………．33 3．1检测基因1型DuCV抗体的间接ELISA方法的建立及血清学调查……．．33 3．1．1DuCV Cap基因的克隆与鉴定………………………………33 3．1．2表达产物的分析………………………………………．．33 3．1．3间接ELISA最佳反应条件的建立……………………………34 3．1．4Western blot符合率的验证………………………………35 3．1．5间接ELISA方法的初步应用………………………………．36 3．22011年山东部分地区肉鸭鸭群基因2型DuCV血清学调查…………．．37 3．2．1表达产物的SDS—PAGE分析………………………………．．37 3．2．3 DuCV抗体的iELISA检测结果……………………………．．38 3．3基因1型、2型间接ELISA检测结果的对比分析…………………39 3．3．1两种已建立的IELISA方法的比较…………………………．．37 3．3．2基因l型鸭圆环病毒与基因2型鸭圆环病毒的血清学调查结果比较…37 3．3．3两型IELISA数据对比分析………………………