il-10对口疫病毒感染后免疫调控机理影响的研究.pdfVIP

摘 要 口蹄疫的频繁爆发引起了世界各国的广泛关注，但由于口蹄疫病毒 (Foot．and．mouthdisease virus，FMDV)非常容易发生变异，导致新的变异株不 断出现与更迭，使传统的疫苗防制措施不能有效地应对口蹄疫的爆发和流行。研 究表明口蹄疫病毒感染引起机体分泌多种细胞因子，不同细胞因子通过调节免疫 应答、影响病毒复制等机制在疾病的发生过程中具有重要作用。 cell，DC)是目前所知的机体内功能最强的抗原递 树突状细胞(dendritic cells，APC)，同时也是唯一能将抗原递呈给初始T细胞， 呈细胞(antigenpresenting 并且能激发初次免疫应答的APC，因此其在免疫应答的诱导中具有独特的地位。 而髓系树突状细胞主要分布于机体的表皮和上皮，是进行免疫应答的始动者，同 时怀疑其可能是感染病毒后机体启动最初免疫应答的主要细胞，在病毒感染的过 程中具有重要的调节作用，因此口蹄疫病毒作用于树突状细胞的过程对于机体的 免疫状态具有重要的影响。 引起细胞表面标志的丢失，因此病毒可以逃避免疫监视系统的监控。在病毒感染 过程中DC可能协助病毒传输或贮存，通过DC对于FMDV的递呈等功能的作用能 够对机体的免疫调节过程产生一定的影响。另外，由于DC可通过调节Thl／Th2 之间的平衡，调控机体免疫状态，从而促进抗病毒的免疫应答。而且IL．10可抑 DC分泌IL．10的因素都可能影响DC功能，甚至决定免疫反应的发展方向和结局， 从而影响疾病的发生与发展。因此IL．10、抗IL．10抗体、IL一10分泌的调节因子可 作为干预手段在以DC为靶细胞的人工免疫调控中发挥作用，达到预防并干扰疾 病发生与发展的目的。本研究通过对FMDV感染DC后的抗原递呈以及IL．10调节 RNAi的抗口蹄疫病毒感染的免疫机制进 免疫应答的作用进行了研究，并对IL．10 行了探讨。 本研究以FMDVWFL株为研究对象，采用重组细胞因子GM．CSF及IL．4进行 wFL可以 诱导的方法成功培养出DC，在FMDVWFL株感染DC后发现，FMDV 感染未成熟以及成熟的DC，但在光镜下未能观察到明显的细胞病变，通过问接 免疫荧光试验可以观察到FMDV能成功感染未成熟DC及成熟的DC，荧光定量 RT-PCR鉴定结果证实，未成熟DC吞噬病毒的能力较强，而成熟DC贝J]抗原递呈 能力较强，可以有效地促进小鼠脾淋巴细胞生长和增殖的能力。 通过调节培养环境中IL．10的浓度来研究FMDV感染DC后对于其分泌各种调 节性细胞因子的影响发现，如果在培养液中加入了重组小鼠IL一10，感染FMDV DC中MHCI、MHC II的表达量均有所降低，但是IL．10抗体可以抑制MHCI表达 则升高。 构，并连接到RNAi载体中，通过酶切鉴定以及序列测定分析后可知成功构建了 载体能够通过相关转染试剂进入DC中，但对于DC这类原代培养细胞的转染效率 不高。将所构建的质粒注射小鼠后进行FMDVWFL感染试验后证明，本实验构 建的RNA干扰载体对于机体的免疫状态的调节具有影响，进行FMDVWFL感染 式细胞仪测试后显示该质粒对FMDV 上调作用。 对于病毒感染后的免疫调节功能，从而影响FMDV感染机体后免疫调控作用的发 生与发展。所以，在FMDV感染过程中抑制IL．10可以在一定程度上促进机体的 免疫应答，通过本研究为探索IL．10对病毒感染机体后免疫应答的调控机制做一 前期铺垫，也为进一步研制基于病毒感染后重要的细胞因子IL．10的调节制剂的 研究做一探索。 关键词：口蹄疫病毒树突状细胞白细胞介素10免疫调控 Abstract Author：LangXulong medicine veterinary Speciality：Preventive Xinglong Supervisor：Pro