亚急性瘤胃酸中对瘤胃、瓣胃上皮细胞增殖与凋亡的影响.pdf

摘 要 本研究选取 8 只体况良好关中奶山羊做为试验动物。按体重相近原则随机分为三 组：对照组（n=2 ）、亚急性瘤胃酸中毒（Subacute ruminal acidosis，SARA）组 （n=3 ） 和恢复组（n=3 ）。对照组饲喂基础日粮（NFC/NDF= 1.02），SARA 组和恢复组通过饲 喂非纤维性碳水化合物与中性洗涤纤维比（NFC/NDF ）为 1.02( Ⅰ期) 、1.24( Ⅱ期) 、 1.63(Ⅲ期)、2.58(Ⅳ期) 的4 种日粮诱导奶山羊发生 SARA，恢复组试验动物待 SARA 诱导成功后自由采食青干草 4 周。每期试验期结束进行屠宰，取瘤胃、瓣胃上皮组织。 （1）通过饲喂日粮不同NFC/NDF 比诱导试验动物发生SARA，测定瘤胃pH 值、 挥发性脂肪酸、乳酸及干物质采食量（Dry matter intake ，DMI ）变化来评价SARA 模型的建立。结果表明，当日粮NFC/NDF 比达2.58 时，瘤胃pH 值在 5.5～5.2 之间 持续时间长达 7.58 h/d，奶山羊发生 SARA，瘤胃总的挥发性脂肪酸和丁酸浓度显著 增加 (P0.05) ，丙酸浓度增加(P0.05) ，乙酸浓度升高(P0.05) ，整个试验过程乳酸 的含量一直较低(P0.05) 。 （2 ）通过 HE 染色、显微镜、透射电镜等技术对瘤胃、瓣胃黏膜进行观察，来研 究 SARA 对瘤胃、瓣胃黏膜上皮形态结构的影响。结果显示，瘤胃乳头高度、宽度 及角质层厚度均以 SARA 组最低，瓣胃角质层和粘膜肌层厚度也均以 SARA 组最低。 透射电镜观察结果显示：SARA 组与对照组及恢复组相比，上皮细胞微绒毛排列不整 齐，线粒体肿胀、核固缩、染色质边集化，有较多的凋亡小体形成。 （3 ）通过测定瘤胃、瓣胃上皮蛋白质、DNA、RNA、细胞增殖核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA ）的表达及细胞凋亡指数来研究 SARA 对瘤胃、瓣胃上 皮生长、增殖与凋亡的影响。结果显示，SARA 明显降低了瘤胃上皮蛋白质、DNA 及 RNA 含量，对瓣胃上皮的上述指标均未产生明显影响；SARA 使瘤胃和瓣胃上皮 细胞 PCNA 指数显著降低并对上皮细胞的增殖表现抑制作用；SARA 使瘤胃和瓣胃上 皮细胞的凋亡指数显著增高并促进细胞凋亡。 （4 ）通过测定瘤胃、瓣胃上皮 ATP 酶的活性来研究 SARA 对瘤胃、瓣胃上皮 ATP + + 2+ 2+ 酶的影响。结果显示，SARA 抑制了瘤胃、瓣胃上皮 Na -K - ATP 和 Ca -Mg - ATP + + 酶活性，恢复组显著高于 SARA 组但显著低于对照组；瓣胃上皮 Na -K - ATP 和 Ca2+-Mg2+- ATP 酶活性均以 SARA 组最低，恢复组最高。 综合上述：SARA 不仅影响了奶山羊瘤胃、瓣胃黏膜上皮的形态结构，而且抑制 上皮细胞增殖，促进上皮细胞凋亡，这可能在 SARA 引起瘤胃黏膜屏障功能受损机 制中起重要作用。 关键词：亚急性瘤胃酸中毒；细胞凋亡；增殖性核抗原；屏障功能 Effects of Subacute Ruminal Acidosis on Proliferation and Apoptosis of Rumen and Omasum Epithelial Cell Abstract Eight healthy Guanzhong dairy goats were selected as experimental animals and were randomly allocated to three groups based on body weight, milk yield similar principles: control group、SARA group and recovery group. Control group d