东北地区猪链球对大环内酯类抗生素耐药机制研究.pdf

摘要 摘 要 猪链球菌病是分布范围极广的猪传染病，世界各地均有发生，它不仅可引起猪的败血 症、脑膜炎、肺炎、关节炎等症状，也可以传染给人，导致人感染并死亡，是一种重要的 人畜共患病病原。应用抗菌药物是防治该病的重要手段之一。因大环内酯类药物同时对革 兰阳性球菌和支原体有广谱的抗菌活性，毒副作用小、价格低廉，不仅在人医临床上作为 一线用药或联合用药制剂，而且在兽医临床上也广泛应用，亦可作为青霉素类的替代药物， 兽医临床常用的大环内酯类药物有红霉素、泰乐菌素等，对治疗猪链球菌有良好的作用。但 近年来一些国家均报道猪链球菌对红霉素等大环内酯类抗生素的耐药性呈现明显的上升趋 势，并且存在不同的耐药机制及耐药表型，从而对该病的治疗构成了严重的威胁。目前国 内外已报道的猪链球菌大环内酯类耐药包括ermA, ermB, ermC, mefA 以及23S rRNA 和/或 核糖体蛋白突变引起的耐药，其中最常见的是ermB 基因编码的内在型（cMLSB ）耐药。 本试验从东北三省（黑龙江、辽宁、吉林）猪场采集鼻腔棉拭子，采用传统的病原分 离方法如革兰氏染色、生化反应、血清分群等，分离鉴定了猪链球菌28 株；通过微量稀释 法测定大环内酯类药物敏感性，筛选耐药菌株，并通过双纸片扩散法确定其耐药表型。大 环内酯类对猪链球菌分离株的MIC 范围0.25 ~ 64µg/ml ，红霉素、阿奇霉素和泰乐菌素耐 药率分别为92.8%、92.8%和89.3%，其中，MIC 64µg/ml 的高水平耐药株分别高达84.6%、 84.6%和100%，以内在型耐药表型（cMLSB ）为主。猪链球菌分离株对兽医临床常用的其 他9 种抗菌药的耐药率为35.7% ~100%，耐药率低于50%的只有氯霉素和环丙沙星，且均 为3 耐~ 9 耐的多重耐药株。揭示了本地区猪链球菌耐药的严重性。 通过PCR 方法从分子生物学角度阐明猪链球菌对大环内酯类抗生素的耐药机制，扩增 耐药基因erm （ermA, ermB, ermC ）及mefA/E 。ermA 基因检出率57.1%，ermB 基因检出率 92.8%，同时含有ermA 和ermB 基因的菌株占53.6%，没有检测到ermC 和mefA/E 基因， 部分扩增的 erm 序列已在 GenBank 中注册。猪链球菌分离株ermA, ermB 核苷酸序列与 GenBank 中肺炎链球菌、化脓链球菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌等的erm 基因、转座子、 质粒等具有高度的同源性，ermA 基因的同源性为 83%~100% ，ermB 基因的同源性为 98%~100%，提示猪链球菌与人源及其他动物源型细菌的erm 基因可能存在广泛的交换。 ermA 氨基酸序列与参照序列（X03216.1 ）相比突变点较多，有11 株猪链球菌的 ermA 氨 基酸序列在34 个位点处共同发生了改变；ermB 氨基酸序列与参照序列（AY183117.1 ）相 比突变点较少，有7 株猪链球菌ermB 氨基酸序列与参照序列完全一致，其余19 株分别含 有1~3 个突变位点。说明东北地区猪链球菌对大环内酯类药物的耐药机制主要为抗生素作 用靶位的甲基化，由甲基化酶基因ermA 和/或ermB 介导，ermA 基因序列间变异较大，突 变点较多，ermB 基因序列相对保守稳定，该耐药基因常定位于可转移载体（转座子、整合 子、质粒等）上，可在不同种属细菌间广泛传播。 关键词 猪链球菌；大环内酯类抗生素；耐药机制；ermA基因；ermB基因 I Abstract STUDY ON RESISTANCE MECHANISM OF STREPTOCOCCUS SUIS AGAINST MACROLIDES Abstract Streptococcus suis infection is a worldwide problem in the swine industry which is