th1和th2细胞因子在不同mhc-b单倍型鸡群中的表达分析.pdf

摘要 鸡主要组织相容性复合体(Majorhistoeompatablitycomplex,MHC)是鸡的免疫遗传相关基因， 与疾病抗性或易感性有关，且与经呼吸系统感染的鸡恶性淋巴组织增生性疾病马立克氏病 (Marek’s disease disease，MD)尤为密切。MD抗性鸡和易感鸡感染MDV(Marek’svirus，MDV) 后，细胞因子的转录水平有所不同。 细胞因子的mRNA含量进行了定量检测。结果显示，各组织中m．18的转录水平最高，也_4最低， 在法氏囊中最高，Th2型细胞因子在脾脏中最低。同时，初级免疫器官(胸腺、法氏囊)中刀阶H 中m4受日龄的调节不同，脾脏和PBL中m．4在孵化后早期聚集较多，胸腺中70d高于35d，而肺 脏在35d时较高。PBL中IL．18在56d达到高峰。不同单倍型鸡群法氏囊中细胞因子受日龄的调节 不同。70d时G2鸡群法氏囊中珉N-Y、IL-18和Ⅱ，lOmRNA含量高于35d，而G5鸡群无明显变化 d45 (IL-18)，甚至所下降(IFN-Y、IL-10)。随日龄增长(14 d)，脾脏中玎刚吖转录水平升高， PBL中IL．18和几-lO下降。以上结果表明，不同功能的细胞因子转录水平不同，且在组织中的分 布存在差异；初级免疫器官中，Thl型和Th2型细胞因子相互制衡；不同MI-IC单倍型鸡中细胞因 子转录水平有所差异，且受日龄调节。 为研究MD感染早期，细胞因子在第一道防线—肺脏和重要靶器官—脾脏中的转录水平，本 试验对14日龄的(32系和G5系SPF雏鸡滴鼻接种MDV 方法对感染后4h、24h、48h和4 和IL-10的mRNA含量进行了定量检测。结果表明，4 dpi两鸡群肺脏和脾脏中均出现了MDV的 转录，且肺脏中病毒转录水平高于脾脏，但尚未发生病毒血症。此时，两鸡群肺组织和脾脏中m限 是05鸡群肺脏中的病毒比G2更早进入了脾脏中进行增殖，结合病毒检测结果和细胞因子转录 水平我们推测G5系较(32系对ME)易感。 为能从蛋白水平研究细胞因子的分泌情况，本试验克隆并表达了鸡也-4，利用重组蛋白免疫 5．2软件进行比较分析。结果显示， m叫4蛋白含量进行TWestern-blotting检测，并利用ImageQuant 各鸡群m一4蛋白与mRNA比较结果一致，说明该方法可用于鸡IL4蛋白水平的半定量检测。 本研究为多种免疫相关组织中细胞因子的研究提供了一定依据；在模拟MDV自然感染途径 下，对早期病毒及细胞因子的检测为研究MD的致病作用提供了参考；建立的鸡IL-4蛋白分子半 定量检测方法为从表达水平研究细胞因子提供了借鉴。 I PCR 关键诃：马立克氏病；MHC；细胞因子；双重荧光定量RT Ⅱ Abstract Chicken a relatedto and majorhistocompatablitycomplex(MHC)isgeneticcomplex hnmunity theresistanceto Marek’s infection州廿l ThlandTh2 disease,especiallydisease@D)．AfterMDV,the in different is a cytokinestranscriptedd