β-兴奋剂多残快速检测技术的研究.pdfVIP

摘 要 β-兴奋剂（β -adrenergic agonist, BAA ）属于拟肾上腺素类药物，由于其具有促 2 2 进动物生长、提高瘦肉率的作用曾被作为饲料添加剂应用于动物养殖业中。然而BAA 长期作为饲料添加剂后，它潜在的危害就逐渐被人们认识，会严重危害消费者的身体 健康，因此，建立BAA 残留检测的方法成为关系食品安全的亟待解决的问题。 本文分别采用混合酸酐法和碳化二亚胺法合成了沙丁胺醇（SAL）免疫抗原和包 被抗原，SAL 与牛血清白蛋白（BSA ）的偶联比分别为12:1 和6:1，与卵清蛋白（OVA ） 的偶联比分别为9:1 和4:1 。用免疫抗原免疫兔子后，所得抗血清经饱和硫酸铵法沉 淀和DEAE-纤维素阴离子交换层析纯化，得到纯度较高的抗SAL 抗体IgG 。该抗体 对SAL 有较高的特异性，IC50 为6.004 ng/mL，同时对沙丁胺醇的同系物克伦特罗（CL ） 有85.44%的交叉反应率，IC50 为7.027 ng/mL ，但对其他β-兴奋剂类药物无交叉反应 性。 以该抗体为基础建立了同时检测沙丁胺醇和克伦特罗的间接竞争ELISA 方法。 方阵滴定法确定包被抗原和抗体的最适工作浓度分别为4 万倍和8 万倍稀释。以抑制 率为纵坐标，分别以SAL 和CL 浓度的负对数为横坐标绘制标准曲线，针对SAL 和 CL 的线性方程分别为Y=-20.868X+96.359 和Y=-20.77X+94.722 。该ELISA 方法对 SAL 和CL 的最低检测限分别为0.219ng/mL 和0.253ng/mL 。在空白猪肉和猪尿中按 1-50ng/g(mL)的浓度添加SAL 和CL 后，对SAL 的添加回收率为72.2%-87.8% ，变异 系数分别为4.6%-11.7% ，对CL 的回收率为79.9% -97.4% ，变异系数为1.3%-13.5%。 以该沙丁胺醇抗体为基础，结合免疫胶体金技术，制备了快速检测沙丁胺醇和克 伦特罗的金标试纸条。试纸条直接浸入猪尿中即可在5min 内用肉眼对结果进行判定， 阳性结果为一条红线，阴性结果为两条红线。试纸条对猪尿中沙丁胺醇和克伦特罗的 最小检出限分别为2.0ng/mL 和2.5ng/mL 。 本研究以沙丁胺醇抗体为基础建立了一种快速，灵敏的ELISA方法，并研制了一 种简便、快速的沙丁胺醇免疫胶体金检测试纸条，以期能更加快速有效的监控养殖业 中沙丁胺醇和克伦特罗的非法使用，保障动物源性食品安全。 关键词：沙丁胺醇；克伦特罗；多克隆抗体；ELISA ；胶体金 Study on the method for rapid multi-determination of β -adrenergic agonist Candidate ：Zhang Yafeng Major ：Basic Veterinary Medicine Advisors ：Liu Juxiang 、Wang Jianping Abstract β -adrenergic agonists have the effect of enhancing animal growth and increasing 2 protein synthesis, which are used as feed additives in animal breeding. However, the residues of β -adrenergic agonists in animal tissues would be harmful to consumer, the 2 residue detection was a important work assotiation of food safety. In this study, salbutamol (SA