内蒙古地区奶牛床型子宫内膜炎致病葡萄球菌超抗原基因分布、耐药性及分型研究.pdf

『IllllfllIJ ffJIrrll[IIIIIFIlfllIrllIfllJ Y2600758 本研究由 内蒙古自治区自然科学基金 重点项目(2009zd04)资助 摘 要 临床型奶牛子宫内膜炎是奶牛产后常见的产科疾病，可导致奶牛繁殖能力下 降甚至不孕症的发生。内蒙古自治区是奶牛养殖大省，奶牛存栏量居全国前列， 但该病给本地区奶牛养殖业带来了较为严重的经济损失。葡萄球菌是引起该病发 生的主要条件性病原菌之一，其产生的超抗原毒素与炎性疾病的发生、发展相关。 治疗由致病葡萄球菌引起的兽医临床感染疾病通常采用抗菌药物疗法，但由于奶 牛场兽医临床普遍存在抗菌药物不合理使用现象，导致奶牛源致病葡萄球菌产生 了较为严重的耐药性。因此，开展奶牛源致病葡萄球菌的抗菌药物耐药性调查和 监控研究，对了解和阐明其耐药性的产生机理和流行扩散现状具有重要意义。此 外，治疗奶牛细菌感染性疾病时，由于不同地区，不同养殖场在抗菌药物的选择 和使用方面存在差异，造成奶牛源致病葡萄球菌的耐药特点也存在地区性差异。 因此，开展不同地区奶牛源致病葡萄球菌耐药现状调查研究，可为不同地区奶牛 场治疗由致病葡萄球菌引起的感染性疾病抗菌药物的选用提供科学依据。本研究 通过开展内蒙古地区临床型奶牛子宫内膜炎葡萄球菌的种群分布及超抗原毒力 基因在菌株中的流行、分布情况调查，探讨葡萄球菌在该病发生、发展过程中潜 在的致病作用：在此基础上进一步开展临床分离葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药 表型和分子耐药机理研究，考察内蒙古不同地区奶牛源葡萄球菌的耐药现状和耐 药性产生的原因，可为兽医临床科学、合理的治疗该病提供用药方案；此外，通 过开展内蒙古地区临床型奶牛子宫内膜炎金黄色葡萄球菌的spa基因分型研究， 阐明内蒙古不同地区奶牛源金黄色葡萄球菌中主要流行的spa基因型别及是否 存在流行病学相关性，可为筛选本地区金黄色葡萄球菌疫苗候选菌株和控制由金 葡菌引起的奶牛感染性疾病奠定理论基础。 (1)采用常规细菌分离方法和gap基因PCR及测序法对内蒙古地区临床型奶牛 子宫内膜炎病料中的葡萄球菌进行了分离和种水平鉴定。结果表明，从采集自内 蒙古不同地区的260份病料中，共分离到127株10种不同的葡萄球菌，分离率 为48．8％。其中金黄色葡萄球菌53株，凝固酶阴性葡萄球菌74株。各地区葡萄 球菌，金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌的分离率差异均不显著(p0．05)。 量最多(38株／29．9％)，其次为产色葡萄球菌(S (2)采用PCR技术对l临床分离菌种中15种超抗原基因的携带情况进行了调查。 结果表明，除肠毒素基因see和seg检测结果为阴性外，其余基因均不同程度的 分布于金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌中。其中新型肠毒素基因se{『(49株／38．6％) 同时发现17种不同的超抗原毒力基因组合，携带sec+selj+seln基因型的菌株最 为流行(21株／16．5％)。西部地区凝固酶阴性葡萄球菌的超抗原基因携带率显著 高于中部地区(P0．05)。 (3)采用微量肉汤稀释法测定了19种兽医临床常的抗菌药物及组合对临床分离 菌的MIC。结果显示，分离菌对13．内酰胺类抗菌药物的耐药率在57．6％--79．5％； 对大环内酯类和四环素类抗菌药物的耐药率在40％～50％之间；分离菌对庆大霉 素和3组抗菌药物组合的敏感性相对较高，耐药率仅为l5％左右，所有菌株对万 古霉素均敏感。共发现43株多重耐药菌(33．9％)。不同地区的分离菌株对氟喹 诺酮类药物、克林霉素和庆大霉素的耐药率存在地区差异(p0．05或P0．01)。 采用PCR法对红霉素、四环素和青霉素耐药菌株进行了分子耐药机理的研究。 结果表明，由eFm基因介导的红霉素作用靶点甲基化是本地区奶牛源葡萄球菌对 红霉素产生耐药性的主要机制；由tetK基因介导的外排机制是四环素耐药菌产 生抗性的分子机制：由blaZ基因介导的水解作用是引起该地区青霉素耐药菌株 产生的主要分子机制。 (4)采用头孢西丁纸片法和mecA基因PCR技术对分离菌株进行了甲氧西林耐 药菌的筛选。结果表明，有22株凝固酶阴性葡萄球菌被鉴定为甲氧西林耐药葡 萄球菌，未发现耐甲氧