利用噬菌体展示术鉴定猪瘟病毒e2蛋白抗原表位.pdf

摘 要 swine 猪瘟(classical 一种高度接触性传染病，几乎遍及全世界(除北美洲和大洋洲外)，死亡率高达80％--90％。该 Listed 病被世界动物卫生组织(OIE)列入OIE疾病名录(OIE 动物传染病。 抗原表位．又称抗原决定簇，是抗原分子抗原性的基础。正确而详细地绘制抗原表位图谱对 疾病的诊断、设计无毒副作用的多表位疫苗以及免疫治疗试剂等具有积极的意义。为深入了解 蛋白进行了抗原表位鉴定。 本研究首先利用噬菌体随机12肽库对CSFV 轮筛选，获得一致序列LFDGSNP，与E2蛋白氮基酸序列对比发现，此一致序列与E2蛋白肛 端的B／C和A抗原区7气FDGTNP”。序列具有很高的同源性。为了进一步验证此基序是否为～表 位，将多肽LFDGTNP与GST在原核系统中融合表达，Westernblot和ELISA结果显示表达 猪瘟病毒诊断研究具有一定的参考价值。 HCLV株的E2 另外，本研究利用昆虫杆状病毒表达系统分泌表达了CSFVShimen和CSFV 处糖基化位点的不同所致。用纯化后的重组蛋白Shimen．E2作为免疫原，建立了一株特异性分泌 E2单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为6E10。此细胞株分泌的单克隆抗体可以特异性识别猪瘟 病毒，但与变性的E2蛋白反应很弱，初步推测单克隆抗体6E10可能是针对E2蛋白的构象表位。 利用噬菌体随机12肽库对单克隆抗体进行3轮筛选，获得9个噬菌体克隆，与单克隆抗体6E10 均发生特异性反应，测序结果显示，噬菌体克隆展示一致序列YWH，但与E2蛋白无同源序列， 推测这些克隆为模拟表位。 总之，本研究鉴定了猪瘟病毒一个线性B细胞表位”2LFDGn心”，研制了一株CSFV特异 性单克隆抗体6E10的杂交瘤细胞系，并对其针对的抗原表位进行了初步的鉴定。为深入了解 CSFVE2蛋白结构功能和建立猪瘟病毒诊断方法奠定了基础． 关键词：猪瘟病毒：噬菌体展示；抗原表位鉴定：单克隆抗体 Abstract Classicalswine ofOIEListed oausedClassical virus fever(csF)，one diseases。is by swinefever isa (cSFV)．CSF fataldiseasein witha around80％to itis hi【ghlycontagious pigs mortality 90％，and domainswith to a Epitopes，orantigenicdeterminants，areantigen affinity antibody．Epitopesplay roleinthestructureandfunction veryimportant ofproteinantigens．Precise may epitopemappinghelp morereasonablevaccinesand facilitate design thestructureand diagnosticreagents．Tounderstanding functionofCSFVE2 the in I／2