复合诱变选育β葡聚糖酶高产菌株及其酶学性质的研究.pdfVIP

摘要 B．葡聚糖酶可以将13一葡聚糖降解为小分子，消除麦类饲料中13．葡聚糖的抗营养 作用，从而作为一种饲料添加剂在动物营养界倍受关注。然而，目前，B．葡聚糖酶 生产菌大多由于产酶活力低、发酵培养条件复杂而受到限制。本试验以B．葡聚糖酶 生产菌黑曲霉SDl6为研究材料，首先利用紫外线照射和N+注入技术对其进行改良 育种，并筛选出一株高产菌株ANl；然后对高产菌株液体发酵培养基、最佳发酵培 养条件进行了优化；最后，对高产菌株ANl所产p．葡聚糖酶酶学性质进行研究。 对黑曲霉菌株SDl6进行紫外线照射，结果表明：当照射时间为10min时，黑曲 霉孢子存活率在70％～80％之间，而此时突变率达到最大，因此确定lOmin为最佳照 射时程。矿注入黑曲霉孢子参数研究发现：孢子存活率先是随着注入剂量的增加而迅 速下降，当注入剂量增加到70X2．6X10”N+／cI】a2时存活率出现平缓回升，注入剂量 超过90X2．6X10”N+／crn2时又再次开始下降；随着注入剂量的增大，孢子总突变率 呈现先降后升再降的趋势，正突变率变化与总突变率保持一致，而负突变率逐渐上升。 经紫外线和对反复复合诱变，突变高产菌株ANI的B．葡聚糖酶酶活由出发菌株 研究首先采用单因素试验和正交试验对黑曲霉ANl产13．葡聚糖酶的液体发酵培 养基进行了初步研究，确定了黑曲霉菌株的最适培养基组成：大麦粉4％，豆粕粉2％， 硫酸铵O．3％，13．葡聚糖0．1％，吐温80O．2％，醋酸钠O．1％，抗坏血酸O．1％，碳酸 0．001％。然 钙0．4％，K2I-IP04·3H20 0．03％，FeS04·7H20 0．05％，M：gS04·7H20 后，在优化后的培养基基础上确定黑曲霉ANl产B．葡聚糖酶最适发酵条件，即当发 有利于突变株ANl最大产酶。 对黑曲霉菌株ANl产B．葡聚糖酶基本酶学性质的研究表明：B．葡聚糖酶适宜反 活最高；B．葡聚糖酶在40℃以下有着较好的热稳定性；当pn低于5．0时，B．葡聚 糖酶相对较稳定；金属离子对B．葡聚糖酶酶活力有一定的影响，在5．0mmol／L的离 M92+、Mn2+、FeE+、和K+对该酶表现出明显的抑制作用。 关键词：复合诱变量．葡聚糖酶条件优化酶学性质 Abstract call tomicromoleculeandthe of13 13-·glucanasedecompose13··glucan antitrophic earl beeliminated．Sothe WaSinterestedtheanimalnutrition -glucan 13一glucanase by group asakindofanimalfeeds its restricted additives．But waS foritslow application enzyme and fermentationconditions．Thestrain WaS activitycomplex SDl6the Aspergillusniger materialinthis strainWaS studying experiment．Firstly,thecompoundmutagenesisedby theultravioletirradiationandtheion wescreeneda strain