多重pcr检测门氏菌、大肠杆菌对磺胺类、氯霉素类药物耐药基因的研究.pdfVIP

摘 要 本研究测定了从规模化猪、鸡场分离的33株沙门氏菌和103株致病性大肠杆菌对 磺胺类药物(磺胺嘧啶、磺胺甲基异嚼唑)及氯霉素类抗生素(氯霉素、甲砜霉素、 的标准，判定其耐药性。结果表明，33株沙门氏菌对磺胺嘧啶、磺胺甲基异嗯唑、氯 本研究根据国内外在GenBank中注册的大肠杆菌、沙门氏茵对磺胺药的耐药基因 设计出检测磺胺药耐药基因的二重PeR的两对引物(．如，J．．妇的简并引物和Sul3 物)。通过试验条件的筛选和优化，建立了检测猪、鸡源沙门氏菌和大肠杆菌耐磺胺类 药物基因的二重PCR方法和氯霉素类抗生素耐药基因的三重PeR方法。通过对33株沙 门氏菌和103株大肠杆菌的磺胺药耐药基因及氯霉素类耐药基因进行检测，结果表明， 这两套多重PCR技术与常规PCR技术的符合率达98．5％以上；与药敏试验的符合率达 73．3％～100％，具有很高特异性． 通过灵敏性试验，该多重PeR技术能检测的细菌最低浓度为108CFU／ml。整个试验 过程的时间只用7个小时，检测速度比常规PCR有很大提高。这两套多重PCR可用于 沙门氏菌、大肠杆菌对磺胺类、氯霉素类药物耐药性的快速检测及耐药性的分子流行 病学监测，具有重要的学术意义和应用价值。 6株的 1-1株Sul3基因PCR产物、沙门氏菌双流分离株PIPS 杆菌双流分离株SLPE 序列测定，将测序结果分别与GenBank中相应序列进行比对分析，基因序列同耀率达 AY617070、AY617067和AY617068。 关键词：大肠杆菌沙门氏菌耐药基因磺胺类药物氯霉素类药物多重PCR检测 本研究获得： “十五一国家科技攻关课最项目(2002-BASl4A-17-11)壹助，四川省。十五”畜牧科技重点研究项目资助 l 刖吾 1、概述 1．1猪、鸡大肠杆菌病和沙门氏菌病概述 常广泛。但直到20世纪中叶，人们才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有 病原性，尤其易引起婴儿和幼畜(禽)的严重腹泻和败血症。 ofNewborn 猪大肠杆菌病包括仔猪黄痢(YellowScour pigs)、仔猪白痢(White Scourof di of sease Piglets)及猪水肿病(Edema swine)。仔猪黄痢是由致病性 E 大肠杆菌(Pathogenic coli)引起的一种高度致死性传染病，主要危害1周龄内 的仔猪，特别是l～3日龄仔猪，窝发病率可达90～95％，头发病率在30～60％之间， 死亡率可达80％以上，甚至100％。仔猪白痢是由致病性大肠杆菌引起的10～30日龄 仔猪非败血性、急性肠道传染病，发病率可达80％，影响仔猪生长发育和降低饲料 报酬。二者称为仔猪腹泻性大肠杆菌病。猪水肿病是由某些血清型的溶血性大肠杆 菌引起的肠道毒血症，常见于断奶后l～2周内的仔猪，偶见于育肥猪。王红宁掣1】 的发病率可达20～60％，如果仔猪黄、白痢与其它疫病混合感染，死亡率可达60％ 以上，造成巨大经济损失。王开功等脚(1997)等对贵州省7个地县(市)的规模 化场进行了仔猪大肠杆菌病流行病学调查研究，仔猪黄、白痢发病率为54．79％，病 后1～2天死亡，死亡率达100％。可见，猪大肠杆菌病是我国规模化猪场的重要韵 多发病。 鸡大肠杆菌病是出不同血清型的致病性大肠杆菌引起鸡的急性或慢性疾病的总 称。雏鸡常呈急性败血症经过，成年鸡则以亚急性和慢性感染为主，其病型有败血型、 气囊炎、腹膜炎、卵巢炎、输卵管炎、胶炎、肠炎、关节炎及肉芽肿等病变。在多数 情况下，因受其它应激因数和其它疾病的影响，本病的感染更为严重。