大肠杆菌f18毛fedf蛋白及ltb-fedf融合蛋白的表达及免疫原性研究.pdf

摘 要 1、产肠毒素性丘cohLT全基因的克隆与序列分析 根据GenBank中收录的LT基因序列，设计并合成一对引物，以猪产肠毒素大肠 产物克隆至UpMDl8一T载体上，构建了重组质粒pMDTLT，测序结果表明所克隆的LT ％之间。 2、E 根据Z26520中fedF序列设计1对引物，从发病仔猪的腹泻粪便分离获得的 大肠杆菌中扩增得到fedF基因，经纯化、连接、转化，将其克隆到pMDl8一T中。 97．8％～99．2％。另设计1对引物，利用基因工程方法将所克隆的fedF的编码序 FedF蛋白，该重组蛋白分子量约为30kDa。该重组蛋白的表达量占菌体总蛋白量 的11．17％。将纯化的重组FedF蛋白免疫小鼠，攻毒试验表明免疫小鼠可完全抵 抗致死性的E．coli的感染。 3、大肠杆菌LTB—FedF融合蛋白的表达及免疫原性研究 经PCR、酶切、连接和转化将LTB成熟肽基因按预定的阅读框架插入到表达 杆菌在IPTG诱导下可以高效表达融合蛋白LTB-FedF，该重组蛋白分子量约 40kDa。该融合蛋白的表达量占菌体总蛋白量的23．17％。融合蛋白经纯化后免疫 小鼠，攻毒保护试验表明免疫小鼠只得到部分保护。结果说明在此融合蛋白中 LTB起到了免疫抑制作用，其原因有待进一步的研究。 关键词：F18菌毛；FedF；LTB；融合蛋白；免疫原性。 Abstract and ofITGeneof 1．CloningSequenceAnalysis Ecoli LT One of was to inGenbank designedaccordingsequencespublished pairprimers to LT PCRfromaclinicisolatedEscherichiacolistrain amplifygeneby containing theLT PCR wasclonedinto vector，therecombinant gene．Theproduct pMDl8-T wasnamed clonedLT was of plasmid pMDTLT．The gene sequenced．Results showedthatLT clonedinthis share homologycomparison gene study 97．6％to98．8 in withtheLT onGenBanknuclcotidelevel． ％identity genepublished sequence and ofEcoliF18fimbriaeFedF 2．Expressionimmunogenicstudy protein tothe ofF18accessedon of GenBank,a AccordingfedFgenesequence pairprimers was weTe fromfieldstrainisolatedfrom designed．ThenfedFgeneproductsa