家蚕sch系统胎期高温致死性的基因表达差异研究.pdf

家蚕sch系统胚胎期高温致死性的 基因表达差异研究 特种经济动物饲养专业博士学位申请人：李关荣 指导教师：向仲怀院士、教授 鲁成教授 摘要 f在蚕业生产上，由丁雄蚕体质强健，虫蛹生命力强，茧层率高，茧丝长，解舒率高，雄蚕出丝率比雌 蚕高20％左右，而且雄茧品质好，净度优．纤度细，雄茧缫丝等级高，雄茧单缫比雌雄茧混提高2个等级， 达5A水平，且节约用桑15％左右(黄君霆，1980)，实现单养雄蚕是提高蚕茧品质、降低生产成本的关键措 施之一。因此雄蚕品种的选育研究一直是国内外蚕业科学家关注的焦点之一。 为了实现单养雄蚕，国内外有很多研究者已经和正在寻找有效的途径如孤雌生殖(潘少西等，1996)、 发育虽然在理论上讲一蛾所选卵可全部雄性化，但发育卵率低，发育卵的孵化率更低，技术上还未成熟， 目前仅停留在理论研究阶段：利用平衡致死系的技术体系虽已成熟，且已育成平衡致死系统，能导入实用 品种，操作也较简便，但品保繁琐复杂，成本高，导入实用品种亦较困难：利用限性普斑和限性虎斑虽人 工鉴别雌雄简单，可用于种茧育，但均只能在五龄期以后才能鉴别雌雄，已不可避免地造成了浪费，利用 限性茶斑系统可在三龄期鉴别雌雄，实现共育后雌雄分养，但茶斑基因对经济性状有一定的影响，利用限 性茧色系统尚待进一步研究，利用限性卵色实现的黑白卵光电自动选卵效率高，但成本亦高。 1992年潘庆中等首次发现伴性赤蚁(sch)胚胎期具有温敏性，并证明此温敏性呈伴性遗传。这为雄 蚕品种的选育研究开辟了新的途径。鲁成等(1996)研究了伴性赤蚁蚕催青期的温敏性，结果发现，sch基 因与温敏致死性有密切关系。但该温敏致死性究竟是由于sch基因的多效性，还是与sch基因紧密连锁的 另一个温敏致死基因在起作用，尚无结论。林健荣(1998)研究发现，sch的温敏性状是由位于z染色体 上的一个主基因控制，呈隐性的伴性遗传。朱勇等将sch的温敏性．-导／k实用新品种夏芳和秋自，分别育成 了秋ttsch×夏芳和夏芳×秋白sch两个雄蚕品种。并已在生产上推广应用。可见。利用sch的温敏性实 现单养雄蚕具有十分广阔的应用前景。从其发现至今的10年的时间里已育成了一些雄蚕品种t但迄今为 蚕的温敏性是一复杂的生物学问题，其机理亟待阐明；温敏性状与伴性赤蚁基因(sch)之间的关系也不 l 清楚，限制了其在研究及生产中的利用。从分子水平寻找与sch蚕高温致死性有关的基因是阐明其分子机 理的关键·上 sch蚕胚胎期表现的高温致死性是研究刺激与基因表达差异的理想系统。通过目前的基因表达比较研 究技术，可望找出sch蚕系统胚胎期高温致死的相关基因表达差异。伴性赤蚁胚胎期高温致死性是环境因 ， t 术以来，此技术以其简便易行、灵敏度高、重复性好、具多面性和速度快的独特优点，在克隆差别表达基 因方面迅速超过了其它同类方法如减法杂交，RNA随机扩增和代表性差异分析，DNA 表达的连续分析法(Serial ofGene Ananlysis 的技术手段。近年来正越来越多地用于其它高等真核生物的基因表达和基因克隆研究。在家蚕中运用差别 、， ofcDNAends)法找出其相应 性片段设计基因特异引物，采用快速、简便的5-RACE(Rapidamplification 的cDNA基因，为进一步研究此温敏致死性的实质及其表达的分子机理奠定理论基础；为选育新型的转基 因实心雄蚕品种提供有意义的易于筛选的目的性状基因，这在理论和实践中都具有重要的意义。 l研究结果总结如下。 ＼ 图1一步法提取的总RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 2 1．常温常湿催青36h的夏