同时检测美洲型欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒多重rt-pcr方法的建立与应用.pdfVIP

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2016-02-20 发布于贵州
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同时检测美洲型欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒多重rt-pcr方法的建立与应用.pdf

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同时检测美洲型欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒多重rt-pcr方法的建立与应用

同时检测美洲型及欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒多重RT-PCR 方法的建立与应用 ’ 摘要为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法，本研究针对PRRSV的基因序列设计并合成3对特异性引物，分别为株ORF7基因433 bp／398bp片段；利用AM—Nsp2扩增美洲型经典毒株和变异毒株Nsp2基因338bp／248 基因614 bp片段。经过反应条件的优化，成功建立了能同时检测并区分美洲型经典毒株、高致病性变异毒株以及欧洲型毒株的多重RT-PCR检测方猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应；对重组质粒标准品的检出下限为 1．67×103拷贝／此；在相同条件下进行的重复试验可获得均匀一致的结果。测，结果PRRSV阳性45份，其中美洲型变异毒株41份、经典毒株4份，未检测到欧洲型毒株。 CSF毒株NS2基因508 异毒株Nsp2基因338bp／248 基因614 bp片段。经过反应条件的优化，建立了能同时检测并区分CSF毒株和PRRS美洲型经典毒株、变异毒株及欧洲型毒株的多重RT-PCR方法。均无交叉反应；对CSFV和PRRSV4种重组质粒标准品的检出下限均为 1．67x103拷贝／止。应用该方法对采集的106份临床疑似病料进行检测，结速鉴别检测和流行病学调查提供了有效的技术平台。关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；美洲型毒株；欧洲型毒株；猪瘟病毒；多重RT-PCR；检测方法 and ofa RT-PCRforsimultaneous Establishment multiplexassay application oftheNorthAmericanandthe of detection genotypeporcine genotypeEuropean and virus(PRRSV) syndrome reproductiverespiratory ABSTRACT one tosimultaneousanddifferential Abstract：Inordertoestablish assay detectionoftheNorth andthe American(NA)genotype of and syndrome genotypeporcinereproductiverespiratory three of were werenamedasCO—ORF7， pairsspecificprimersdesigned．ney CO—ORF7 EU-ORF5and which specifically AM-Nsp2，respectively,of 433 ORF7 oftheNA andtheEU bp genefragment genotype amplifiedbp／398