影响克隆胚体外育及移植的因素研究.pdfVIP

中文摘要 本试验以波尔山羊耳成纤维细胞为供体，分别以牛、羊、兔的卵母细胞为受体进 行体细胞核移植，构建了山羊一兔、山羊一牛和山羊一山羊三种重构胚。研究了不同的 胞质环境对重构胚体外发育的影响与核移植中的胞质效应，并对异种克隆胚胎采用了 去透明带移植和配种后再移植的方法，探讨移植方法和妊娠因子对异种克隆胚胎在受 体动物体内发育的影响，旨在为解决异种克隆胚移植不易着床发育的难题和为提高动 物克隆效率提供理论依据。试验获得了如下结果： l-以山羊耳成纤维细胞为供体，以牛、羊、兔卵母细胞傲为胞质受体构建重构 胚，并经体外培养，发现不同的胞质受体均能支持重构胚的早期发育，但受体胞质对 重构卵的重构胚早期发育速度和卵裂率均有显著影响。其中山羊一牛和山羊一兔重构卵 各组数据问差异显著(pO．05)。 2．山羊一兔和山羊一牛两种异种克隆胚的体外早期发育速度与山羊一山羊同种克隆 胚及山羊的超排胚胎相比，以山羊一兔异种克隆胚的发育速度最快，牛的最慢，山羊一 山羊同种克隆胚及山羊超排胚胎的次之。此外，山羊一兔异种克隆胚、山羊一山羊同种 vs105±3，26 克隆胚和正常受精艇的囊胚期卵裂球数目也存在显著差异(86±4．09 vsl20±4．05，pO．05)。 3．经对超排获得的山羊受精胚、山羊同种克隆胚和羊一兔异种克隆胚的囊胚期胚 胎染色体分析表明，三种来源的胚胎其染色体数目均为60条，且所有常染色体均为 端部着丝点染色体，X染色体为第二大的端部着丝点染色体，说明山羊同种克隆胚和 山羊一兔异种克隆胚均为山羊的核型，是供体细胞核在不同胞质中的重新编程的结果。 4．不同融合操作及培养密度对于羊一兔熏构胚的早期发育速度及卵裂率均有影 8．70％，各组数据闻差异显著(P0．05)。而且共培养重构胚的发育速度也要明显快于 1)对于重构胚的卵裂率 分滴培养。而不同的培养密度(15枚／100“l和5枚／loou 胚发育速度则明显要快一些。 5．以山羊为受体，采用配种后再移植、去透明带移植和常规移植三种移植方法， 共移植山羊-牛异种克隆胚62枚(配种后移植12枚，常规移植50枚)、山羊．兔异克 同种克隆胚2枚(常规方法移植)，但均未产生克隆后代。 综上所述，以山羊体细胞为供体，以兔、牛和山羊的卵母细胞的胞质为受体进行 体细胞核移植，表明不同的受体胞质均能支持克隆胚早期发育，并且这些克隆胚均表 现为供体的核型，但受体胞质以及电融合和培养方案对克隆胚早期发育都有显著的影 响。这些研究结果，不仅对完善动物克隆技术，而且对促进动物繁殖学、发育生物学 的发展均具有重要的科学意义。 关键词：克隆胚胎，体外发育，胞质效应，移植 U Abstract The血rce ofreconsmKted of types embryos(recoIls协lctedembryo goat—rabbit， and nucleart眦sfer ear goat-boVine goat—goat)werepmducedrespectiVelyby usinggoat nrbroblastcellsasdonors and and thefactors rabb沁bovinc goat ooctyes弱recipients，and of enVironm