猪圆环病毒2型东毒株全基因的序列分析及分离新方法的建立.pdfVIP

摘 要 circovurus 猪圆环病毒2型(Porcine type2，PCV2)不仅可以引起断奶仔猪多系统 dermatitisand 衰竭综合征(PMWS)，而且还与猪皮炎肾病综合症(Porcinenephropathy and syndrome，PDNS)、增生性坏死性肺炎(Proliferativenecrotizing 吸道综合征(porcine disease respiratory 奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原以来，PCV2病毒在世界各地迅速蔓 延。2000年郎洪武首次报道检测出PCV抗原，之后越来越多的报道证实PCV2病毒 在我国的猪场中也有广泛的感染，已给养猪业造成了相当严重的经济损失。临床上 PCV2常与猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(Porcineand reproductiverespiratory syndromevirus，PRRSV)、伪狂犬病毒(Pseudorabies swinefever Parvovirus，PPV)、猪圆环病毒l型(PCVI)、猪瘟病毒(Classicalvirus，CSFV) 胞上又不产生细胞病变，给PCV2病毒的分离工作带来一定的困难。2006年暴发的 的病例。以往对于PCV2的分离，一般是通过PK-15细胞的传代培养来达到净化的目 的，最后靠针对特定病毒的特异性检测鉴定净化的效果。而对于排除其他未知的病毒 却没有好的方法。因此本研究在分离鉴定猪高致病性蓝耳病病例中的PCV2病毒过程 中，利用PCV2全基因组的感染性建立了一套行之有效的PCV2病毒分离方法。主要 内容及结果如下： · 区的猪场猪高致病性蓝耳病病例的猪体淋巴结病料应用PCR技术进行了PCV2全基 进行测序，并将测序结果与国内外已发表的参考毒株进行序列比对分析。结果表明， 分离到的4株PCV2全基因大小相同，都为1767bp，分别命名为GDYFJ，GDSHJ， GDZQJ，GDBLJ。它们与国内不同地区的分离株全基因组序列同源性差异较大，没 有明显的规律。但与3株两广地区的毒株亲缘关系较近，由此可见，这次新疫情中 PCV2的变异较小，在引发疫情暴发的因素中更多的可能与PCV2引起感染猪的免疫 抑制有关。 环化后转染PK．15细胞，利用PCV2全基因组的感染性复制出完整的病毒。通过PCR 鉴定和间接免疫荧光试验(IFA)的方法证明，转染细胞中产生了具有复制活性的病 毒颗粒，再运用荧光定量PCR技术筛选出病毒含量较高的细胞，增殖病毒提高病毒 的含量和毒力，从而成功地分离获得纯化均一的PCV2毒株。这为进一步开展PCV2 感染性的研究，以及进行病毒的免疫和致病机理研究以及病毒的分子流行病学研究奠 定了基础。 关键词：猪圆环病毒2型；全基因组；病毒分离；序列分析 Anew forPorcineCircovirus2Isolationand Approach Type full of Isolate the Genome Length AhalysisGuangdong Abstract Porcinecircovirus cause type2(PCV2)could pigs and dermatitis multisystemicwastings