猪圆环病毒2型北地方株分离鉴定及orf2基因的克隆与原核表达.pdfVIP

摘要 circovirus 猪圆环病毒2型(Porcine 2，PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征 type abcntionand (Post-weaningmultisystemicwastingsyndrome，PMWS)、母猪繁殖障碍(Sowmortality dermatitisand syndrome，SAMS)、猪皮肤肾病综合征(Porcinenephropathy 呼吸道综合征等相关疾病的重要病原。PCV2是一种免疫抑制性病毒，损害感染猪的免疫功能，引起 继发或合并感染，造成的损失难以估计，PCV2已经成为严重制约我国养猪业的重要病原之一。由 于病毒经常以亚临床感染的形式出现，常易被忽视，因此应当进一步加强对PCV2感染的流行病 学及分子生物学的研究。PCV2的ORF2基因编码病毒的主要结构蛋白，此蛋白具有良好的免疫 原性，基因序列保守，可用于临床诊断。 病料中提取病毒核酸，用PCR方法扩增含有EcoRI酶切位点的PCV2型特异片段，酶切鉴定后 别选取1份PCR检测阳性病料，经处理后接种无污染的PKl5细胞，盲传6代后，用扩增全基因 组的引物P3／P4，采用PCR方法扩增病毒的全基因组检测细胞分离病毒的效果；回收扩增全基因 I和HindIII双酶切鉴定后， 组的PCR产物，克隆到pMDl9-T载体中，经序列测定、PCR及Sac 获得3株分离毒的阳性克隆株，分别命名为HBa株、HBb株、HBc株。通过多序列比对和遗传 相差8个碱基，具有很高的同源性。遗传进化树分析证实了本试验分离毒与GeneBank中 模化猪场有效的诊断防治猪圆环病毒病提供了科学依据，丰富了本地区PCV2感染的流行病学资 料。 I和Hind 基因片段插入到载体pMDl9-T中，经PCR、SacHI双酶切鉴定为HBa分离株的ORF2 端含有许多串联或单联的稀有密码子，而稀有密码子的使用频率影响基因的表达；ORF2编码蛋 检测方法的建立奠定了基础。 关键词：PCV2；分离鉴定；ORb2基因；克隆；表达 IsolationandIdentificationofPorcineCircovirus2IsolatedinHeBei Type of Provinceand and ORF2Gene CloningExpression Xiushan Candinate：Zhang Medicine Specialty：PreventiveVeterinary Advisor：Sun Jiguo Abstaet Porcinecircovirus themaincausativeof type2(PCV2)is agentPost-weaning andtheotherrelateddisoases． (PMWS) MultisystemicWastingSyndrome