猪肺炎支原体sbr green荧光定量pcr检测技术研究.pdfVIP

摘 要 猪肺炎支原体(Mycoplasma Enzoofic 检测、菌落形成单位(colonyformingunit,cvu)检测、显微镜检测计数以及聚合酶链式反应 (polymerasechainreaction,PeR)等方法。上述方法费时费力，实验过程中容易污染，常引起鉴定、 计数失误，导致试验结果具有波动性。 近年来，国内外开始利用荧光定量PCR技术检测支原体并对支原体进行精确定量的研究，但 只做到Mhp的定性检测，仍然没有解决Mhp定量检测的难题。 No．NC 本实验以OcnBank公布的Mhp232株(ACCESSION 25934，ACCESSIONNo．NC p46基因序列作为靶序列，参考J株(ATCC (ACCESSION No．NC 物，通过对荧光定量PCR扩增曲线、标准曲线、熔解曲线的分析，筛选出符合Mhp荧光定量PCR 定量检测要求的引物pllOrealF／R：构建了含有Mhp SBYR GREEN荧光定量PCR检测方法。该方法 立了以pll0(p76)基因序列作为靶序列的Mhp 准确、快速、灵敏、无污染，具有良好的特异性、重复性，能够检测到lO拷贝／“L的标准质粒， 可用于Mhp培养物和疫苗半成品的快速定量检测。 关键词 猪肺炎支原体：SYBRGREEN；荧光定量PCR；P110基因；定量检测。 Abstract the of SwineEnzoofic hyopneumoniae(Mhp)is Mycoplasma pathogea classical for detectionof methods agc quantitative MhpCCU(color changeunit)，CFU(colonyforming orPCR andindefiniteresults． unit)，MicroscopicCountingassay诵血labor-intensive,time-consuming PCRhasbeenusedfordetection Time andidentification twoof Re∞ntly，Real ofmycophsma,and them瓣aboutdeh蜘onof still its couldnotsolve about qualitative Mhp．which problemquantitative detection． Inthis 232 strain(GENBANKACCESSIONNo．NC J No，NC 25934，G】狲BANKACCESSloN 7448sUain ofMhpstrain(ATCC 007295)andMhp No