猪肺炎支原体免胶体金快速诊断试纸的研制.pdfVIP

IIlllrtlfflft lffflf fllffffflffllfrlffflffrfflll Y1 801035 中文摘要 染性、慢性、高发病率和低死亡率为特点，主要症状为咳嗽、气喘、饲料的利用率低， 病猪生长十分缓慢，甚至生长停滞，严重影响养猪业的经济效益。因此对该病及时作 出诊断有利于降低经济损失。本研究针对目前MPS诊断耗时长的问题，运用胶体金免 疫层析技术建立MPS快速诊断方法。 物，粗提产物再通过免疫亲和层析进行纯化。纯化的猪肺炎支原体膜蛋白，经 KD、40 SDS．PAGE电泳检测显示含六条蛋白条带，分子量分别为：83KD、66KD、 36KD、34 KD和27KD。用纯化的猪肺炎支原体膜蛋白免疫60曰龄健康家兔，获得 的兔抗猪支原体高免血清与纯化的猪肺炎支原体经双向琼脂扩散，检测到抗血清效价 为1：32。 采用柠檬酸三钠还原法制备粒径为20nm的胶体金，用紫外分光光度计的波谱扫 描功能对胶体金溶液在可见光400nm．700rim范围内进行扫描分析，结果显示胶体金颗 粒大小均一(19．76nm)，适合免疫标记。以制备好的胶体金标记纯化的猪肺炎支原 体膜蛋白，获得稳定的免疫胶体金。确定标记条件为：最佳标记pH为8．2，纯化的猪 肺炎支原体膜蛋白最佳结合量为9I．tg／ml。用聚酯纤维素膜浸泡标记好的免疫胶体金， 干燥后制得金标垫。同时将纯化的猪肺炎支原体膜蛋白和兔抗猪肺炎支原体IgG分别 作为诊断试纸的检测线(T线)和控制线(C线)包被于硝酸纤维素膜(NC膜)上， 组装成试纸条。确定了免疫胶体金的稀释度为1：2，T线包被浓度为2mg／ml，C线包被 浓度为4mg／ml。 使用研制的MPS试纸条和ELISA方法分别对54份血清样品进行检测。结果显 明MPS试纸条具有快速、灵敏、特异性强、重复性好、操作简便，对临床推广有实 际运用价值。 关键词猪肺炎支原体，亲和层析，胶体金，诊断试纸 of Gold for the Assay DevelopmentImmunogolloidalStrip Detecting MycoplasmaHyopneumoniae Yi bing(PrevemVeterinaryMedicine) Directed Yan(SichuanUniversity) byProf．Xiong Agriculture Abstract the of Pneumoniae etiologicalagent MycoplasmaPneumoniae(Mhp)is Mycoplasma of isachronic diseaseofswine．MPSischaracterized swine(MPS)，whichrespiratory