猪脑心肌炎病毒xlc株结构蛋白vp1的原核表达及间接elisa方法的建立.pdfVIP

猪脑心肌炎病毒GXLC株结构蛋白VPl的原核表达及间接 ELI SA方法的建立 摘要 脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis 属的成员，可以引起仔猪脑炎、心肌炎以及母猪繁殖障碍为特征的传染病。本研 究针对EM硝结构蛋白VPl基因设计了一对特异性的引物，采用RT—PcR方法扩增 出831 EMCV VPl基因重组表达质粒pET一32a_VPl。经酶切、测序鉴定正确后，将重组质 果显示VPl蛋白获得成功表达，融合蛋白的分子质量约为52ku，表达的重组蛋 性血清发生特异性的免疫印迹反应。 利用纯化的重组蛋白VPl作为包被抗原，建立了用于检测EMCV抗体的间接 ELISA方法。经优化，获得间接ELISA的最佳条件：以pH9．6、浓度为O．05mol／L 的碳酸盐缓冲液做包被液；抗原包被浓度为0．625ug／mL，室温作用2h后4℃包被 过夜；待检血清稀释度为l：40，作用时间为60 min；酶标二抗兔抗猪IgG—HRP工作 浓度为1：6000，待检血清与酶标二抗作用条件为37℃30min；底物在室温避光 条件显色时间为15 min；血清样本阴阳性临界值为0．33。特异性试验表明重组VPl 抗原与猪瘟、猪圆环病毒病、猪蓝耳病、猪伪狂犬病、猪口蹄疫的阳性血清无交 叉反应。 品进行了EMCV抗体检测，结果，被检猪场的阳性率为loo％，被检血清样品的阳性 率为91．47％，其中仔猪的血清阳性率为43．14％，后备母猪的血清阳性率为84．7％， 育成猪的血清阳性率为91．67％。表明广西地区猪群已经普遍感染EMCV。 结果表明，本研究成功表达了猪EMCV结构蛋白VPl，建立了基于VPl蛋白的间 接ELISA方法，开展了广西地区猪群EMCV感染的血清学调查，为进一步研究EMCV 的防控技术奠定了基础。 关键词：脑心肌炎病毒；猪；结构蛋白VPl；原核表达；间接ELISA；血清学调查 Il L 1 OF E)PRESSIONOFSTRUCTURA PROTEINVP PROKARYOTIC VIRUSGXLC AND ENCEPHALOⅣⅣOCARDITISSTRAIN PORCDJE ELISAASSAY ESTABLISHⅧNTOFnoIRECT ABSTRACT Virus to t11e (EMCV)belongs genus Encepha|omyocarditis 国以汤v妒凇of cancauseaninfectious the‰ily尸勿D磁口V护姚8，谢lich acute and in and diseaSeCharacterized by encephalitismyocarditispiglets seVere failureinsows．Aof was reproductiVe pair primersdesigned tothestructure l