硝唑尼特对杜氏什曼原虫的药效学及一般毒性研究.pdfVIP

硝唑尼特对杜氏利什曼原虫的药效活性及一般毒理学研究 摘要 杜氏利什曼原虫∞窖西^口玎妇面以绷玎啦．坊是一种专性细胞内寄生的鞭毛虫，可感染人、 哺乳动物和爬行动物等，引起人畜共患的利什曼原虫病(工e西办，，z册泌括)又称黑热病。该 病呈世界范围流行，目前全世界黑热病患者超过1200万，另外有3．67亿人面临着感染威胁 I¨。20世纪50年代，黑热病曾在我国长江以北地区广泛流行，是我国人群中五大寄生虫病 之一。 传统治疗药物有多价锑类化合物、喷他脒和两性霉素B等，然而近年来对多价锑剂的 耐药性日益严重，极大的限制了它们的应用，另外，两性霉素B常导致中毒性肾损害、过 敏反应、低血钾、发热和心脏毒性等，而喷他脒又存在疗程长、复发率高、用药不方便等 缺陷【2】。因此，研究一种新的抗黑热病药物已经迫在眉睫。 虫病和由肠贾第鞭毛虫所致1—11岁的儿童腹泻【4】。另外，大量实验研究表明其不但有抗多 种寄生虫活性，同时还具有抗细菌、抗病毒活性【51，目前，NTZ用于治疗艰难梭状芽胞杆 菌的相关疾病、轮状病毒引起的胃肠炎和丙型肝炎已经进入临床研究阶段【稍]。但至今尚 未见其用于杜氏利什曼原虫的研究报道，而且对于NTZ的毒理学研究公开报道较少，因此， 我们选用硝唑尼特对厶越行药效活性试验，以观察该药对Ld的驱杀效果，同时进行了硝 ．唑尼特的一般毒性研究，以初步评价其安全性，为该药的临床应用奠定基础。 体外试验应用镜下观察和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法，检测六个剂量组 性对照组加入等量药物溶剂DMSO，空白对照组不做任何处理。结果显示，药物作用48h 54．74％、45．86％、3 试验采用姬母萨染色实验和电镜实验观察了药物对虫体形态结构的影响，结果，200pg／mL 硝唑尼特作用72h后，吉姆萨染色可见L∥前鞭毛体严重变形，有部分变成虫体碎片，鞭 毛脱落，细胞质内出现空泡，核消失，动基体不完整，与阳性对照组相似；100舭和 50“g／mI，NTZ组的虫体出现鞭毛脱落，动基体不完整，胞膜不清晰；而空白对照组和阴性 对照组虫体形态基本无变化，均呈长梭形，并排成菊花状，胞膜、核、动基体、鞭毛完整、 清晰。电镜下观察，可见药物试验组虫体细胞基质紊乱，有凝聚块，细胞核基质出现空斑， 部分细胞核膜破裂，线粒体膜消失：空白对照组与阴性对照组虫体结构完整、核清晰。 体内试验应用有限稀释法、荧光定量PCR法和肝组织病理切片检测三个剂量组 很好的保护效果，能明显减少肝细胞坏死、肿胀和胞核崩解，与阳性对照组比较仅表现出 汇管区静脉轻度充血和少量蛋白样物质析出。另外，本试验建立了利什曼原虫的荧光定量 PCR检测方法，该方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、自动化程度高等优点，此方 法可为黑热病的实时监控和防治提供非常有效的检测技术手段。 硝唑尼特一般毒性试验按照农业部《新兽药一般毒性试验技术要求》进行。小鼠经口 灌服中毒剂量的硝唑尼特后，出现活动减弱，被毛湿润，精神萎靡，有的阵发性抽搐，有 的呈游泳状缓慢爬行，部分小鼠出现腹泻，食欲减低，体重减轻，死亡时间多在给药后ld 至3d内，死亡动物无性别差异，剖检发现腹腔粘膜呈土黄色，肠壁变薄，肠管内有褐色水 样液体，呈出血和坏死性肠炎病变，存活动物在2d至6d后逐渐恢复正常。灌服溶剂玉米油 8．1059瓜g；蓄积毒性试验表明，硝唑尼特属弱蓄积或者基本无蓄积毒性，蓄积系数K5．26； 耐受性试验表明，硝唑尼特耐受性良好。 综上所述，硝唑尼特在试验药物浓度下对杜氏利什曼原虫具有很强的抑制和杀灭作 用，杀虫效果与剂量呈正相关，对感染杜氏利什曼原虫的小鼠具有很好的保护作用，对试 验动物毒性低，无蓄积毒性，耐受性良好。 关键词：杜氏利什曼原虫；硝唑尼特；药物活性；一般毒性：小鼠 Antileishmanial0fnitazoxanide emcacy against上e括厅m口耐口 咖咒DⅧ咒f and generaltoxici够 Abstract ￡e西乃聊册肠isakindof c强iI