胸膜肺炎放线杆菌影（ghost）的制备及其免疫效力评价.pdfVIP

摘 要 摘 要 猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious 高度接触性传染病。自1957年Pattison首次报道本病以来，在世界范围内广泛流行，并给 各国养猪业带来了严重的经济损失。目前，国内主要使用灭活疫苗预防和控制本病，但由于 APP血清型较多，灭活疫苗对不同血清型APP的交义保护效果十分有限，冈此开发新型疫 苗已经成为研究热点。 本实验通过PCR技术扩增噬菌体PhiXl74的溶菌基因E，将该基冈连接到含有九 基冈的溶菌盒插入到App．E．coli穿梭载体pGZRS．18中，成功地构建App．E．coli穿梭溶菌 4074菌株中， 质粒pGZRS—EZ,。采用电击穿孔法将其转入胸膜肺炎放线杆菌APPI型shope 含有裂解质粒的胸膜肺炎放线杆菌在280C条件．卜．生长到对数生长期，然后添加氯霉素至 终浓度1I-tg／ml，升温到420C诱导其溶解，制成了胸膜肺炎放线杆菌菌影。电镜观察菌影细 胞形态完整保持了细菌的基本细胞形态，内容物全部被释放到胞外，细胞表面发生明显的皱 缩。本实验构建的溶菌质粒pBV-E和pGZRS．E九在各自宿主菌中的溶菌效率分别达到了 99．86％和99．99％。本实验为进一步研究菌影这一新型菌苗及佐剂形式奠定了基础。 将胸膜肺炎放线杆菌菌影疫苗以5×109cfu／只的剂量分两种方式对实验猪进行免疫：实 验I组(肌肉注射免疫组)、实验II组(滴鼻免疫组)和对照组，实验组每组6只，对照组 4只。进行猪的免疫攻毒保护实验。免疫共分2次，每次间隔两周。第2次免疫后第14d， 间接ELISA方法检测血清抗体水平。结果表明，1免1周后肌肉注射APPGhosts免疫后猪 血清抗体水平明显上升，与滴鼻免疫组和对照组相比差异显著(p0．05)。l免2周抗体水 平略有下降，2免1周后抗体水平明显上升。2免2周后肌肉注射免疫组抗体水平略有上升， 与滴鼻免疫组和对照组相比差异极显著(pO．01)。而滴鼻免疫组与对照组的差异始终不显 著(p0．05)。攻毒2周后，根据攻毒后猪的存活率、肺脏病理变化及间接免疫荧光检测， 综合评价胸膜肺炎放线杆菌菌影疫苗的免疫保护效果。结果表明，通过肌肉注射胸膜肺炎放 线杆菌菌影疫卣可以激发动物体内产生较好的免疫应答，并明显优丁滴鼻免疫组。本研究制 备的胸膜肺炎放线杆菌菌影具有良好的应片j前景，为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供 参考。 东北农业Jj学农学顺t“学位论还 ． 关键词胸膜肺炎放线杆菌；菌影菌苗；保护效力 II Abstract The andEvaluationofImmune of Preparation Efficacy Actinobacillus Ghosts pleuropneumoniae Abstract Porcine a diseasewhichiscaused contagiouspleuropneumonia(PCP)ishighlycontagious by Actinobacillus characterizedseverefibrinous pleuropneumoniae(APP)andby necrotizing