脂多糖刺激对奶输卵管上皮细胞pge2和pgf2α合成分泌的影响研究.pdfVIP

1 本课题受国家自然基金(项目编号：31 60490)；内蒙古自然基 目编号：NCET-1卜1019)资助。 摘 要 前列腺素E2是一种重要的炎性介质，是由环氧合酶催化花生四烯酸代谢产生的 一种二十碳不饱和脂肪酸，当机体组织器官受到细菌毒素侵害后，细胞产生包括前 列腺素E2在内的大量的炎症介质。本实验通过利用细菌脂多糖刺激奶牛输卵管上皮 细胞，检测与前列腺素E2和F2。有关的合成酶的表达状况，以及脂多糖对前列腺素 E2和F2。合成分泌的影响。旨在阐明感染G‘致病菌时，奶牛输卵管过量分泌前列腺 素E2和F2。的病理学机制，为治疗由炎症引起的输卵管分泌失调病症搜集基础实验 数据。 方法：1)建立奶牛输卵管上皮细胞体外培养技术。2)不同浓度l gg／mL、2．5 gg／mL、5gg／mL、7．5pg／mL、10pg／mL的LPS作用于奶牛输卵管上皮细胞培养 24 h，采用实时荧光定量PCR技术检测COX．1、COX．2mRNA表达量，以确定LPS 的最佳作用浓度。3)采用实时荧光定量PCR技术检测LPS不同作用时间(2h、4h、 8h、16h、24h、48h、72 mPGES．2、cPGES和PGFSmRNA表达的影响。4)采用实时荧光定量PCR技术检 测COX抑制剂、NF—r,B抑制剂和LPS刺激对奶牛输卵管上皮细胞前列腺素合成酶 h、6h、 表达量变化。5)采用ELISA方法检测5LPS在不同作用时间(2h、4 gg／mL 8h、12h、16h、24h、36h、48h、72 h)和不同抑制剂刺激对奶牛输卵管上皮细 胞合成分泌PGE2和PGF2。的影响，并分析LPS对奶牛输卵管上皮细胞生成 PGE2／PGF2。含量比例的影响。 结果：首先，成功培养奶牛输卵管上皮原代细胞及传代细胞。其次，用LPS刺 激奶牛输卵管上皮细胞后，COX．1、COX．2mRNA表达量显著升高，且呈现浓度依 赖性。第三，5 LPS作用于奶牛输卵管上皮细胞后，COX一1mRNA表达量在 lag／mL h显著升高：mPGES．2 表达：mPGES．1mRNA表达量在16～72 mRNA表达量在16～72 h显著升高；cPGESmRNA表达量在4～72h显著升高：PGFSmRNA表达量在8～16 h显著升高。第四，5 LPS作用于奶牛输卵管上皮细胞后，能够改变奶牛输卵 pg／mL 和PGF2。合成分泌。 列腺素发挥着必不可少的关键作用。LPS刺激可诱导PGE2／PGF2。的生成比例失调而 影响正常输卵管微环境平衡。 关键词：奶牛输卵管上皮细胞；LPS；环氧合酶；PGE2；PGF2。 Studieson of and a LPSin secretion induced PGE2PGF2 by bovineoviduct cell epithelial Abstract isan mediatorsof isakindof ProstaglandinE2 important inflammation，which eicosenoicunsaturatedacid