转基因动物中外基因整合位点的分析.pdfVIP

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2016-02-20 发布于贵州
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转基因动物中外基因整合位点的分析.pdf

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转基因动物中外基因整合位点的分析

IlYllllM27tlll7lUllllllllU7llll6llUl／16lll 目录摘要…………………………………………………………………………………………………………I 英文摘要…………………………………………………………………………………………………ⅡI 1引言………………………………………………………………………………………………………1 1．1转基因动物国内外研究现状……………………………………………………………………1 1．2MYF6基因…………………………………………………………………………………………2 1．3FAr．1基因………………………………………………………………………………………………………………………．2 1．4外源基因整合位点的检测技术……………………………………．．．．…………………………3 1．4．1荧光原位杂交………………………………………………………………………………．．3 1．4．2个体基因组文库筛选法……………………………………………………………………．4 1．4．3反向PCR…………………………………………………………………………………………………………………．4 1．4．4招晕罗bPCR…………………………………………………………………………………………………………………．4 1．4．5锚定PCR……………………………………………………………………………………．．5 1．4．6随机引物PCR………………………………………………………………………………．．6 1．5基因组测序技术…………………………………………………………………………………．8 1．5．1第一代测序技术……………………………………………………………………………．．8 1．5．2第二代测序技术……………………………………………………………………………一8 1．5．3第三代测序技术……………………………………………………………………………10 1．6荧光定量PCR技术……………………………………………………………………………．．11 1．7本试验研究的目的及意义……………………………………………………………………．．12 2材料与方法……………………………………………………………………………………………．14 2．1材料………………………………………………………………………………………………………………………………14 2．1．1实验动物……………………………………………………………………………………14 2．1．2主要器材………………………………………………………………………………………14 2．1．3实验试剂……………………………………………………………………………………14 2．1．4分析软件……………………………………………………………………………………．15 2．1．5主要试剂的配制……………………………………………………………………………15 2．2实验方法…………………………………………………………………………………………．15 2．2．1外源基因整合位点的检测…………………………………………………………………15 2．2．2整合位点附近宿主基因表达量检测……………………………………………………～24 2．2．3数据分析……………………………………………………………………………………26 3结果与分析………………………………．……………………………………………………………27 3．1外源基因整合位点检测结果…………………………………………………………………～27 3．1．1整合过程中重组质粒连接情况……………………………………………………………27 3．1．2整合过程中同源重组情况…………………………………………………………………27 3．1．3整合过程中重组质粒断裂情况……………………………………………………………30 3．1．4在重组质粒酶切位点下游设计特异性引物扩增结果…………………………………．31 3．1．5非特异性扩增的情况………………………………………………………………………33 3．1．6扩增到宿