镉致体外培养鸡持-生精细胞凋亡机理的研究.pdfVIP

摘要 镉是一种工业上应用广泛的具有潜在毒性的重金属，已逐渐成为环境中重要的污染物之 一。大量研究表明，镉能够引起雄性动物和人生殖机能减退，诱导生殖细胞凋亡、坏死等不 可逆变化。但大多数试验集中于对啮齿类动物和人的研究，对于禽类的研究较少。本试验以 体外培养鸡原代支持．生精细胞为研究对象。在培养液中加入不同浓度CdCl2，通过对鸡支持 一生精细胞活性、贴壁性能、细胞凋亡、抗氧化功能、DNA损伤、细胞内游离钙离子浓度及 精细胞凋亡的机理。研究结果表明： 1．应用台盼蓝拒染试验、MTT比色法、二硝基苯肼比色法检测了支持．生精细胞的活性 和培养上清液中LDH活性，并观察了细胞贴壁性能，结果表明镉能够抑制体外培养鸡支持． 生精细胞的活性，影响支持细胞的贴壁性能及支持细胞与生精细胞之间的黏附力，同时测定 了染镉24h对支持-生精细胞的半数抑制浓度为28．41：1：0．42p．mol／L，表明镉对鸡支持．生精细胞 具有毒性作用。 2．应用AO／EB双荧光染色法测定了染镊后支持．生精细胞的凋亡率和坏死率，结果表明， 低浓度镉主要引起细胞凋亡，而高浓度镉使细胞凋亡和细胞坏死同时发生。 3．应用碱性单细胞凝胶电泳测定了镉对支持-生精细胞DNA的损伤效应，结果表明镉能 够诱导鸡生殖细胞DNA损伤，这可能是其致禽类生殖细胞损伤的机制之一。 4．通过对细胞内抗氧化功能的检测，结果表明镉能够导致支持．生精细胞内SOD、 GSH-Px活性下降，MDA含量增加，细胞抗氧化功能降低，发生氧化应激，这可能是镉诱导 禽类生殖细胞凋亡的机制之一。 5．应用半定量RT-PCR法和荧光探针法检测细胞内CaMmRNA表达水平和游离钙离子浓 度，结果表明镉能够引起细胞内CaMmRNA表达水平下降，游离钙离子浓度升高，干扰细胞 钙离子的转运，导致细胞钙稳态失衡，这可能是镉诱导禽类生殖细胞凋亡的机制之一． 和caspase-3mRNA的表达水平，进而诱导生殖细胞的凋亡． 本试验从细胞、分子水平上探讨镉致禽类生殖细胞毒性作用，揭示了镉能够降低生殖细 胞的活性、诱发氧化应激、损伤细胞DNA，干扰细胞钙稳态，影响细胞内基因表达、诱导细 胞凋亡，阐明了镉致禽类生殖细胞毒性机制，为畜禽镉中毒的防治提供了理论依据，丰富了 毒理学和比较医学的资料，对保护畜牧业的健康发展，保护野生禽类，维持生态平街具有重 要意义。 关键词：镉；鸡；支持．生精细胞；细胞凋亡；氧化损伤；钙稳态 EffectsofCadmiumon MechanismofCock Apoptosis Sertoli．GermCellinV破OCulture Abstract metal is inthe andbecome Cadmium，aheavy of toxicity used industry potential extensively in 0neofthemost theenviromentA amountofrescarcheshaveindicated importantpoll咖ts large to thatCadmiumcallleadthefunctionaldecrease inmaleanimalsandhumanand ofreproduction inducethenonreversible necrosis cells．Mostoftimstudies and changesuch蠲apoptosisofgerm tookcock focusontherodentan