镉对大鼠大脑皮神经细胞毒性损伤的机制.pdf

哀燕：镉对人鼠人脑皮质神经细胞毒性损伤的机制 中文摘要中又捅斐 镉是具有很强毒性的重金属，常见于工业场所、食品污染物和烟草中。低浓度镉就具 有毒性，因为其在体内的半衰期长达10～30年，易在体内蓄积，可对包括肺脏、肝脏、肾 脏、睾丸、脑和胎盘在内的多个器官产生严重损害。镉可进入脑实质和神经元导致人和动 物模型的神经学上的改变，引起注意力低下、痛觉敏感性高、嗅觉异常和记忆力下降。一 些以神经元和神经胶质细胞为模型的体外研究表明，uM级的镉就具有神经毒性，且这种细 胞毒性与诱导凋亡有一定的相关性，并得出镉致皮质神经细胞凋亡是引起中枢神经系统异 常及导致记忆减退、智力发育低下的主要原因，但镉致神经细胞凋亡的机制尚未阐明。本 d 研究用孕18～19 Sprague 胞模型，通过体外试验探讨了镉对大鼠大脑皮质神经细胞的毒性损伤效应及其凋亡可能的 作用机理，为进一步认识镉的神经毒性作用提供理论依据。 1、镉诱导大鼠大脑皮质神经细胞凋亡的线粒体途径 为从线粒体途径研究镉致大鼠大脑皮质神经细胞凋亡的机制。本研究在建立体外原代 h， 大鼠大脑皮质神经细胞培养的基础上，以不同浓度(0、5、10、20gmol／L)醋酸镉染毒12 Hoechst mRNA转录水平。以10 水平和线粒体膜电位(△、|，m)；实时荧光定量PCR检测Caspase一3 gmol／L醋酸镉染毒大鼠大脑皮质神经细胞0、12、24禾H48 PARP裂解情况。结果表明：经免疫组化染色鉴定，所培养的原代细胞为神经元特异性烯醇 化酶(NSE)阳性，呈现典型神经细胞特征。与对照组相比，各染毒组细胞表现核皱缩、 mRNA转录水平极显著升 P0．01)，△vm显著或极显著降低(P0．05或P0．01)，Caspase．3 高(P0．01)，同时经10 裂解大片段。说明镉诱导大鼠大脑皮质神经细胞凋亡可能通过线粒体途径。 2、钙稳态失衡在镉致大鼠大脑皮质神经细胞凋亡中的作用 为研究钙稳态失衡在镉致大鼠大脑皮质神经细胞凋亡中的作用，并探讨内质网钙库释 放在镉致神经细胞钙稳态失衡机制中的作用。本研究用不同浓度(0、5、10、20 Ltmol／L)醋 7，N’-tetraacetic 四乙酰氧甲基酯，1，2-bis(2一aminophenoxy)ethane—N，N，N ester(10 borate(50gmol／L)]单独或联合作用于大鼠大脑皮质神经细 硼酸盐，2．aminoethoxydiphenyl 胞12h。Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡的形态变化，流式细胞术检测细胞内[Cap]j， Hoechst umol／L 组CaM fP0．05或P0．01)。说明镉可能通过影响CaMmRNA转录水平与维持钙稳态相关酶 经细胞内钙稳态，而细胞内钙稳态失衡在镉诱导大鼠大脑皮质神经细胞凋亡中起着重要作 用。 3、镉对大鼠大脑皮质神经细胞MAPK信号通路的影响 为探讨不同浓度、不同时间染镉对体外培养的原代大鼠大脑皮质神经细胞中细胞外信 MAPK磷酸化的影响，大 号调节蛋白激酶(ERKl／2)、c．Jun氨基未端激酶(JNK)和p38 h及10 鼠大脑皮质神经细胞用不同浓度(0、5、10、20¨mol／L)醋酸镉染毒3gmol／L醋酸 镉染毒不同时问(0、1、2、3、4、5、6