不同途径免疫nv弱毒苗诱导鸡体黏膜和系统免疫反应的研究.pdf

山东农业大学博士学位论 中 文 摘 要 鸡新城疫（Newcastle disease，ND ）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus ，NDV ） 引起的一种急性、败血性、高度接触性传染病，是危害世界养禽业的最重要传染病之一。 目前，预防ND 虽然有多种有效疫苗，但由于免疫途径和免疫方法不当等原因，致使鸡 群发生ND 的现象不断发生，对养鸡业的健康发展造成了很大的损失。一般认为系统免 疫在鸡抵抗NDV 的感染中发挥主要作用，但在生产实践中却存在着鸡体血清抗体水平 高仍然发病的现象，原因何在？有待探索。黏膜免疫是鸡体免疫系统产生免疫应答的重 要组成部分，对鸡体的局部免疫及全身免疫发挥着重要作用。长期以来，关于NDV 弱 毒疫苗免疫的研究主要集中于全身系统免疫，而对特异性黏膜免疫的发生规律的研究较 少，难以全面揭示NDV 弱毒疫苗的免疫保护机理。因此，本研究对NDV 弱毒苗经不 同黏膜途径免疫雏鸡后呼吸道和消化道等局部黏膜特异性抗体和抗体阳性细胞的的发 生规律进行了全面系统的研究，主要试验结果如下： 1. 鸡SIgA 的纯化及其抗病毒活性 首先应用硫酸铵盐析和聚乙二醇 （PEG ）沉淀粗提鸡胆汁中的分泌型IgA （SIgA ）， 再经Sephadex G-200 凝胶过滤和DEAE纤维素离子交换层析纯化SIgA， 用SDS 电泳和琼脂扩散试验检测其纯度和活性，然后采用鸡胚接种试验、鸡胚病毒中和试验和 攻毒治疗试验，检测鸡SIgA的抗NDV活性，结果表明，纯化的鸡SIgA终浓度为3.8mg/mL ， 重链分子量约为67kD，轻链分子量约为28kD ；SIgA处理NDV后，能明显降低鸡胚尿囊 液中NDV 的血凝效价，与血清组差异不显著(P0.05) ；鸡SIgA的鸡胚病毒中和指数为6.2， 低于免疫血清；另外，用纯化的SIgA治疗攻毒的SPF鸡，其治愈率为46.7% ，同样与血 清治疗组差异不显著(P0.05) ；试验结果证明鸡SIgA具有一定的中和NDV 的能力。 2. 不同途径免疫NDV 弱毒苗诱导鸡体黏膜和系统免疫发生规律的研究 通过建立了检测NDV 特异性抗体的间接ELISA 方法, 对7 日龄SPF 鸡经不 途径 免疫NDV 弱毒苗后的血清、胆汁、呼吸道和消化道分 液中NDV 特异性 SIgA、IgG 和IgM 的消长规律进行了检测， 时检测了血清HI 抗体滴度。结果表明，点眼滴鼻免 疫和饮水免疫鸡的血清、胆汁、呼吸道和消化道分 液中均可检测到NDV 特异性SIgA、 IgG 和IgM，其中：IgM 在所有样品中检出时间最早，大部分于免疫后第3d 检测到， 于第7d 达到高峰后迅速下降，是鸡体早期抵抗NDV 感染的主要抗体；IgG 大部分于免 疫后第7d 检测到， 于第2 1d 达到高峰，是血清的优势抗体；SIgA 大部分于免疫后第 1 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 不 途径免疫NDV 弱毒苗诱导鸡体黏膜和系统免疫反应的研究 7d 检测到， 于第28d 达到高峰，在胆汁、呼吸道和消化道分 液中抗体水平最高，且 维持时间最长，是NDV 弱毒苗诱导鸡胆汁、呼吸道和消化道分 液中抗NDV 的主要 抗体。各组免疫鸡不仅在诱导部位黏膜分 液中产生高水平的特异性SIgA、IgG 和IgM， 而且在远端黏膜也产生抗体，表明鸡的黏膜免疫类似哺乳动物，也具有共同黏膜免疫的 特点。点眼滴鼻免疫诱导的血清HI 抗体滴度和特异性SIgA、IgG 和IgM 抗体水平显著 高于饮水免疫，表明点眼滴鼻免疫诱导的系统体液免疫强于饮水免疫。点眼滴鼻免疫在 气管洗液和肺洗液诱导产生的特异性 SIgA 水平显著高于饮水免疫，而饮水