几种哺乳动物胚干细胞建系与初步鉴定.pdf

几种哺乳动物胚胎干细胞建系与初步鉴定 摘要 stem cell cell，ES)是一种将着床前胚胎的内细胞团(inner 胚胎干细胞(embryonic mass，ICM)在体外培养而成的细胞，目前，仅小鼠和大鼠ES细胞系能在嵌合体中进入生 殖嵴并形成生殖细胞，而其他哺乳动物，都没有建立能形成生殖细胞的ES细胞系。我们 运用全新的培养体系对兔、大鼠和牛ES细胞进行建系研究，以及研究小鼠ES细胞的悬 浮培养体系，建立了兔、大鼠、牛和小鼠胚胎干细胞系，并经过长期培养仍保持发育的 多能性。 将兔、大鼠和牛的囊胚在体外机械法分离ICM，在各自的培养体系中培养，用机械 法传代，将兔ES细胞培养．至lJ4代，将大鼠和牛ES细胞培养到10代和7代，均保持典型的 在培养液A中能够快速增殖，AKP染色呈阳性，并保持未分化状态而传20代以上，注射到 nod．sciddx鼠后腿肌肉，成功长出畸胎瘤。因此得出： 2mM／L—Glutamine+1％MEMNAA+O．1 ng／ml mM／L13一mercaptoethanol+8 作培养基所构成的体系中，能很好的被分离培养，小鼠内胚层细胞和CEE联合使用能很 好的支持原代兔ES细胞的生长。 同样以86％DMEM+10％SR+3％CEE+1％MEMN从+2mmol／LL．Glutamine +O．tmmol／L 体系中，保持未分化状态传到10代以上；而牛ES细胞在原饲养层，保持未分化状态 到7代左右。 在15％FBS+1000IU NAA mLIF+0．2mg／ml m +2mmol／LL-Glutamine+0．1 可在体外维持不分化状态，能够快速增殖。 关键词：小鼠胚胎干细胞；大鼠胚胎干细胞；兔胚胎干细胞；牛胚胎干细胞；建系；悬 浮培养：AKP染色；畸胎瘤 III Derivationand CharacterizationofSeveral Preliminary OlllCStemellll naimammalianlamAnimalmamC Embryonic Abstract linesare derivedfrominvivo hasbeen blastoeysts．There stem(ES)cellroutinely produced Embryonic and other beenderivedfrommice effortstoestablishEScelllinesfrom animals，SOfar,have considerable ofEScellsfrom and effectsofdifferentconditionsontheestablishment rabbits，rats rat．Here，wee