我国部分地区h-prrsv分子流行病学初步分析及sdwf株nsp2蛋白的原核表达.pdf

NSP2蛋白的原核表达 摘要 and Virus， 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Syndrome ReproductiveRespiratory Porcine 呼吸道疾病为特征的传染病。高致病性猪蓝耳病(HighlyPathogenicReproductive and RespiratorySyndrome 起的一种急性高致死性传染病，病毒致病力强，传播速度快，猪群发病率和死亡率高。 本试验对我国部分省市地区HP．PRRS分子流行病学进行了初步分析并实现了NSP2蛋 白原核表达及初步建立了检测PRRSV的间接ELISA方法。 本研究用细胞分离法从8省不同地区发病猪场猪组织病料中分离到28株PRRSV流 Star软件对其进 行毒株。扩增并测序获得NSP2基因和ORF5基因片段序列，利用DNA 行核苷酸序列分析。分析表明28个分离株ORF5，NSP2基因序列自身之间同源性分别 在NSP2和ORF5区域的变异较大且表明全部分离株均属于美洲型毒株。 and 本文参考Genbank中收录的猪繁殖与呼吸综合征(PorcineReproductive RespiratorySyndrome 扩增截短的Nsp2(deletingNsp2)基因，双酶切后将目的基因插入到原核表达载体 pET-32a(+)中，转化大肠杆菌BL2 检测和可溶性试验证明，Nsp2得到了高效表达，融合蛋白的分子量约为36．5ku，表达 产物以可溶性方式存在于表达上清液中，表达产物能被PRRSV抗体所识别，且具有较 好的生物学活性。 用镍柱亲和层析法从上清中纯化了目的蛋白，以纯化后的目的蛋白作为抗原包被聚 乙烯微量反应板，初步建立检测PRRSV的间接ELISA方法。通过特异性、重复性、符 合性等试验及对临床样品检测的结果显示，该方法是一种较特异、敏感、快速、操作简 便的方法。 onMolecular ofliP-PRRSV Analysis Preliminary Epidemiology inPartsofChinaand ofGeneNSP2of Prokaryotic Expression PRRSVirusSDWF Abstract Porcine and iScharacterizedsevere failurein Syndrome ReproductiveRespiratory by reproductive sowand diseasein Porcine and isan Syndrome respiratory youngpigs．HighlyReproductiveRespiratory acutelethalinfectiousdisease，whichis strainvariationof