桑种质资源的遗多样性及分子系统学研究.pdf

摘要 桑树是多年生的重要经济作物。是家蚕的唯一饲料。桑树在我国地理分布广．易适应不同 的生态环境，容易通过自然和人工杂交，这些特性形成了丰富的桑树种质资源。利用DNA分 子标记，本文开展了桑种质资源的遗传多样性和分子系统发育研究，对桑种质的鉴定、保护、 利用、核心种质的构建和遗传育种具有重要的实用价值和理论意义。本论文的主要研究内容如 下： 一、桑树栽培种和野生种间遗传多样·l生的ISSR和SSR比较分析 构建了一个桑树(CA)l，微卫星富集文库，筛选出了10对具有多态性的SSR引物。首次 利用新的SSR引物和已报道的5对SSR引物以及筛选出的ISSR引物．研究了27个桑树品系 (包括19个栽培种和8个野生种品系)的遗传多样性。15个ISSR引物共扩增条带为138条， 示的平均遗传相似系数分别为0．7677和0．6131。2种标记揭示野生种内所有遗传多样性指数高 于栽培种内，说明栽培、驯化引起了桑树遗传多样性的丢失。利用UPGMA法构建的ISSR和 SSR聚类图，野生种和栽培种有较远的亲缘关系。基于ISSR和SSR数据的主成分分析fPcA) 进行了ISSR和SSR标记的相关性溅验。根据研究结果，进一步提出了桑树种质资源的保护策 略。 二、我国桑树选育品种ISSR指纹田谱的构建及遗传多样性分析 利用ISSR标记构建了24个选育桑品种的指纹图谱，用3种独立的方法(特殊的标记；特 异的谱带类型；不同引物提供的谱带类型组合)可以有效地鉴别桑树选育品种，证明ISSR标记 在桑树品种的鉴别方面是一个有效的工具和方法。17个ISSR引物拭扩增出80条带，40条带具 有多态性，占50．O％。24份选育桑树品种间平均遗传相似系数、Nei‘S基因多样性(genediversity) 说明我国选育桑品种间遗传距离较小，亲缘关系较近，遗传基础较狭窄。UPGMA法聚娄和PCA 分析都清楚地显示了24个桑树选育品种的亲缘关系，聚类结果与桑树品种的系谱基本…致。 三、我国不同生态型桑树品种遗传多样性的ISSR分析 利用ISSR标记评价了我国8个不同生态类型桑树群体结构和遗传变异。来源8个生态类型 的66个桑树地方品种间，12个ISSR引物总扩增条带数为83。50条为多态性条带，多态性比 于群体内的变异。基因流(Nm)为0．4683，说明群体间遗传漂移引起了当地遗传差异及群体分 化。平均遗传相似系数为O．8456，8个群体闻的遗传相似系数变异范围为0．8441 tO．9640，说明 不同群体间的遗传多样性存在差异。根据ISSR标记遗传相似系数按UPGMA法对66个地方桑 树品种进行了聚类分析。从聚类结果采看，每个生态型的大部分桑树品种聚为一类。 四、桑树二倍体及人工诱导同源四倍体遗传变异的ISSR分析 利用[SSR分子标记技术。对6份=倍体桑树品种和经秋水仙素化学诱变得到的同源四倍体 间的DNA遗传差异进行了研究。农桑8号、湖桑197号、育2号的二倍体及其同源四倍体间 53％， 扩增条带完全一致，无羞异，湖桑32号二倍体及其同源四倍体1SSR多态性最高，达到了23 说明不同桑树材料经秋水仙素诱变后在DNA分子遗传结构上著异较大。 五、桑树无性系遗传变异的ISSR初步分析 利用ISSR初步分析了桑树无性繁殖系的遗传变异，在田间和组织培养无性系中仅检测到1 个变异，此结果说明桑树通过无性繁殖方法繁殖个体仅存在少量遗传变异，遗传性状稳定。 六、凤尾桑及其芽变品系间退传变异的ISSR分析 利用ISSR引物，从分子水平分析了风尾桑及其芽变株系的遗传变异。从8个ISSR引物扩 增结果来看，3个引物的扩增产物在株系间无差异，从变异株系扩增条带来看，风尾芽变变异 最大。本结果从分子水平证明了芽变株系的遗传结构差异。 七、基于nrDNA的ITS序列研究桑属(尊麻目：桑科)系统发育 用PCR产物直接测序法对9个种3个变种共13份桑种质和构属构树的ITS序列进行了测 定。结果表明：桑属植物ITSl长度平均约为189 rDNA为152 bp：桑属5．8S bp； ITS2长度平 均为212 bp；桑属ITS序列