狮头鹅干扰素基的克隆及重组α-干扰素的抗病毒活性.pdfVIP

狮头鹅干扰素基因的克隆及重组仅一干扰素的 抗病毒活性 摘要 疫调节作用等广泛的生物学活性。目前，商品化的干扰素制品已逐渐在动物生产和兽 医临床中应用。 本研究从狮头鹅外周血细胞中提取基因组DNA，采用巢式PCR方法扩增狮头鹅 基因全长576bp，编码191个氨基酸和一个终止密码子，分析其与其它品种家禽IFN．a 的核苷酸序列同源性介于41．2％--98．3％之间，推导的氨基酸序列同源性为13．O％～ 码子，分析其与其它品种家禽的IFN-y核苷酸序列同源性介于82．4％-99．6％之间， 推导的氨基酸序列同源性为66．7％--98．80／60；结果表明不同品种鹅间的干扰素具有极 为相似的蛋白质二级结构；同时亲缘关系越近的物种同源性就越高，不同物种在进化 过程中的变化较大。 编码序列，将成熟肽编码序列亚克隆至表达载体pET32a(+)，成功构建原核融合表达 过不同IPTG浓度、不同温度诱导表达的rGoIFN．a的可溶性分析后，结果表明 rGoIFN．a主要以包涵体的形式存在。采用溶菌酶和超声波裂解、4moFL尿素洗涤、 酶酶切、镍离子柱亲和纯化、透析浓缩得到狮头鹅a一干扰素蛋白。纯化后的蛋白用 于狮头鹅旷干扰素抗病毒活性的研究。rGoIFN．a经过Westernblot分析，在硝酸纤 行特异性反应。 I 采用微量中和试验评价了rGolFN—Gt的抗病毒活性。制备鸡胚成纤维细胞，采用 Roakin病毒株的鸡胚成纤维细胞半数感染量。试验结果表明，NDV TCID50法测定NDV 5465。成纤维细胞病变抑制试验检测moⅢN一0【抗病毒活 Roakin病毒株的TCID50是104 抑制NDv 达3．34x105U／mg。 关键词：狮头鹅，a一干扰素，丫_干扰素，克隆，原核表达，抗病毒活性 II ofInterferonsGenein andAntiviral Cloning Shitou-goose EffectofRecombinant Interferon-alpha Abstract to broad functionssuchas Interferons，belongcytokinesfamily,havebiological inhibitioneffectsofviral oftumorcellsandirnmune replicatin，proliferation regulation．Up to commercialinterferonshave toanimal date，the productsgraduallyapplied production andclinical therapy． With chain of interferon-Ctshitou polymerrasereaction(PCR)，thegene goose from DNAextractedfrom blood (GoIFN-a)wasamplifiedgenome peripheralcells(PBCs)． ThetotalRNAWasextractedfrom