猪繁殖与呼吸综征病毒北京分离株n蛋白的原核表达.pdfVIP

摘 要 合成一对引物，应用RT．PCR方法扩增出P砒峪V北京分离株的N基因。将所扩增片段 LV株、周边国家及国内分离株进行核苷酸和推导氨基酸同源性比较，并构建了系统 发育进化树。结果表明，N基因的原核表达载体构建成功，命名为pET-N,测序结果 显示N基因全长372bp，包含完整的N基因的开放阅读框架，编码123个氨基酸；经序 系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。 用IPTG进行诱导表达。对培养条件及诱导表达条件(诱导温度、IPTG最佳浓度和作 中成功表达，所表达的重组蛋白分子量为33KDa左右，与预期大小相符。优化实验确 达4h后表达蛋白量达到高峰，蛋白表达量约占菌体蛋白的50％。蛋白的可溶性分析表 明表达产物主要以包涵体形式存在。本实验应用Ni-NTAHis·Bind树脂层析柱在变性条 的特异性蛋白条带，表明表达产物的纯化良好。Westernblotting分析结果显示，重组 蛋白与PRRSV阳性血清有特异性结合反应，说明表达的蛋白具有良好的免疫反应性， 表达蛋白可用作基因工程诊断抗原。 本研究为进一步研究N蛋白的结构、功能和开发新型诊断试剂盒提供了理论与物 质基础。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；N蛋白；表达； of ProteinofPorcine ProkaryoticExpressionNucleocaplsid and Virus(PRRSV) ReproductiveRespiratorySyndrome Isolatesfrom ing Beij Abstract A of were and totheN pairprimersdesignedsynthesized genesequences according ofAmerican and genotypereproductiverespiratorysyndrome porcine GenBank．TheN of and virusstrainwas geneporcinereproductiverespiratorysyndrome Was RT-PCR．The thenclonedintothe amplifiedby amplifiedgenefragment prokaryotic cell vector recombinantWastransformedintohost expression pET-32a(+)，theplasmid wereselectedand after and clones double DH5a，thepositive enzymes sequenced digestion PCRidentification．N were DNAStarand with