杆状病毒泛素、角体基因启动子分析及表达系统的应用.pdfVIP

摘 要 本文围绕杆状病毒泛素(H6坷Ⅳf，帆曲f)基因启动子结构及功能元件、杆状病毒IEl及^一对 晚期曲i年Il极晚嬲弦所启动子的作蟮、参与杆状病毒晚期基因泛素表达的病毒因子、耐高温B —glucosidase在家蚕中的表达及纯化等方面作了一定的研究。 (1)杆状病毒”6由“fffn基因启动子结构及功能元件的分析 克隆的启动子与BmNPvT3株及AcMNPvc6株“6f启动子的同源性分别为98．9％、99．5％， 二者之间的同源性为92．8％。该序列中具有两个杆状病毒晚期基因转录起始位点TAAG和两个 1’ArAbox．三个cAAT。Nonhem h blot证明杆状病毒曲f为晚期表达基因，在病毒感染后约12 戏更甲．开始人鼙表达，并具有多个转录本。 bp：而肋rⅣ6f启动子中则主要位丁A1’G上游一382～124bp：在A1．G上游．383～187bp的196bp启 动子片段，含有一个TAAG、cAAT基序和1-ArrAbox，也具有启动子的活性。 对曲i启动子进行突变分析发现，T’ArrAbox和TAAG突变后均能卜．调该启动子的活性，而 cAAT突变却可以上调启动子的转录活性大约3至4倍左右。 (2)杆状病毒IE·l及^，j对晚期Ⅳ6f和极晚期p口协启动子的作用 左右：与胁，共转染时，顺式连接的^一可上调曲f启动子转录约2lo：反式作坩则为9倍。幽 启动子序列中与缸．，响应的区段主要位于ATG上游．595～332bp之间。 对丁极晚期_口。腩启动子，在BmNPv感染的细胞中，顺式连接的^一可增强报告基冈表达283 倍，反式作朋为1．8倍左右：报告质粒与掂．』共转染时．顺式或反式的^rj可分别增强口。腩启动 子控制的报告基冈表达62l倍羊¨4．2倍。 刖报告质粒转染家蚕5龄第二天的幼虫．^一同样可显著提高曲f和阳腩启动子的转录活性。 (3)参与杆状病毒晚期基因“6f表达的病毒因子研究 通过构建BmNPV基因纽文库，对参与“研基因转录的病毒因子进行了筛选。单独的立即早 据．J能反式激活“6f基因启动子的转 期基因把D、把2、∥j8等对“所基因启动子没有激活作用。 ’ 片段均能启动“6f启动子的转录。 (4)耐高温B—glucosidase在家蚕中的表达及纯化 199．5 797．4 u鹰升血淋巴，19 U，头 获得了能够表达卢glucosidase的重组病毒。酶活性为10 m．n，酶活性没有人 蚕。酶的最适反应温度为105℃，最适反应pH为5，0，在90一1lo℃保温10 扯家蚕朴状病毒表达系统中的成功表达，为该酶的人规模生产及应心奠定了坚实的基础。 关键词 轩状病毒，寤动子，病毒因子，基因表选 Abstract e仃ectofIEland加3OnI砒e“6iarId Iate Westudiedthecharactersof“6f the Very p0腩 promoteL fktorsinvoIvedinlate“6f of pfomoteractiv咄viral geneexpression嬲weII鹳theexpressjon f的m themlostable触，wosfd缸PJ!ym∞∞Ⅺ加rf∞m． This jncludes