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常规标本的制作和HE染色 薛辉 吉林大学基础医学院 切片的一般程序 封固 石蜡切片 取材 固定(24-48h) 脱水(70,80%4h;90,95%2h,100%1h(2)) 透明(二甲苯10min(2)) 浸蜡(30min(3)) 包埋 切片 染色 显微标本制作技术 从保存时间长短分，有临时玻片标本和永久玻片标本。从制作的方法 来分，有涂片、压片、装片(也叫整装法)、磨片和切片等 。 切片法 徒手切片法 石蜡切片法 火棉胶切片法 冰冻切片法 材料和夹持物 切取的标本 1.徒手切片法 滴水 放置标本 加盖盖玻片 叶的横切 取 材 1. 材 料 新 鲜 最 好 是 动 物 的 心 脏 还 在 跳 动 时 取 材 ， 立 即 投 入固 定 液 内 。 应 争 取 在 死 后 半 小 时 内 处理 完 毕 2. 组 织 块 力 求 小 而 薄 ,以 不超 过 5毫 米 为 在 可 能 范 围 内 也 应 力 求 短 小 。 以 使 固 定液 能 迅 速 而 均 匀 地 渗 入 组 织 块 内 部 3. 勿 使 组 织 块 受 挤 压 。 取 材 时 ， 组 织 块 可 稍 取 大 一 点 。 4. 要 熟 悉 取 材 的 部 位 要 能 准 确 地 按 解 剖 部 位 取 材 ， 如 胰腺 ， 一 般 取 胰 岛 较 多 的 胰 腺 尾 部 ， 脊 髓 取 腰 膨 大 与 颈 形 大 5. 选 好 组 织 块 的 切 面 纵 切 或 横 切 往 往 是 显 示 组 织 结 构 明 晰 的 关键 。 6. 保 持 材 料 的 清 洁 组 织 块 上 如 有 血 液 、 污 物 、 粘 液 、 食物 、 粪 便 等 ， 可 用 生 理 盐 水 冲 洗 ， 然 后 再 入 固 定 液 ， 但 要 注 意 防止 组 织 损 伤 。 空腔性器官 注意横断面和纵断面 保护内皮和粘膜 横断：气管、食管、血管 纵断：胃底、肠、心脏 心瓣膜 左心室 左心房 特殊的组织或者器官 血液、骨髓：涂片 肌肉、神经： 骨、牙齿：脱钙 切片 酸 固 定 的 方 法 1. 蒸 气 固 定 法 比 较 细 小 而 薄 的 标 本 ， 可 用 饿 酸 或 甲 醛 蒸 气 固 定 。 主 要 用 于 血 液 或 细 胞 涂 片 以 及 某 些 薄 膜 组 织 等 的 固 。 如血液 涂 片 ， 则 应 在 血 片 未 干 燥 前 就 与 饿 酸 蒸 气 接 触 2注 射 、 灌 注 固 定 法. 某 些 组 织 块 由 于 体 积 过 大 或 固 定 掖 极 难 渗 入 内 部 或 需 要 对 整 个 脏 器 或 整 个 动 物 进 行 固 定 。 如 肺 可 将 固 定 液 从 气 管 或 支 气 管 注 入 .全 身 灌 注 固 定 较 大 动 物如 兔 、 猫 、 狗 、 猴 及 整 个 人 体 ,固 定 液 输 入 后 ， 可 不 必 即 刻 取 材 。小 动 物 ， 如 大 、 小 鼠 ，也可灌流固定. 3. 小 块 组 织 固 定 法. 从 人 体 或 动 物 取 下 的 小 块 组 织 ， 须 立 即 置 入 液 态 固 定 剂 中 进 行 固 定 ， 这 是 应 用 最 广 泛 最 经 常 的 方 法 。 固 定 的 目 的 1. 迅 速 阻 止 组 织 、 细 胞 的 死 后 变 化 ， 防 止 自 溶 与 腐 败 ， 使 之尽 量 保 持 生 前 的 状 态 与 结 构 。 2. 使 细 胞 内 的 蛋 白 质 、 脂 肪 、 糖 ， 酶 等 成 分 转 变 为 不 溶 性物 质 ， 以 保 持 其 原 有 状 态 。 3. 使 组 织 内 各 种 物 质 成 分 产 生 不 同 的 折 光 率 ， 以 便 染 色 后 易于 鉴 别 和 观 察 4. 使 组 织 块 在 脱 水 、 包 埋 、 切 片 、 染 色 等 过 程 中 不 易 损 坏 。 5使 不 同 组 织 成 分 对 染 料 有 不 同 的 亲 和 力 ， 经 过 染 色 处 理 后易 于 辨 认 。 6. 防 止 细 胞 过 度 收 缩 或 膨 胀 而 失 去 其 原 有 形 态 结 构 。 7. 使 组 织 块 硬 化 ， 便 于 制 作 薄 片 。 注 意 事 项 及 影响 固 定 的 因 素 1. 组 织 块 不 宜 过 大 ， 一 般 以 厚 度 5毫 米 ， 长 宽 不 超 过 15x15毫 米 。 2. 固 定 液 的 量 一 般 以 组 织 块 大 小 的 20倍 为 宜 3. 必 须 选 择 渗 透 力 强 ， 又 不 使 组 织 过 度 收 缩 或 膨