一株新的羽毛角白降解菌的鉴定、研究与应用.pdfVIP

摘要 角蛋白作为一种硬性蛋白，具有不溶于水和抗分解的性质，一般条件下不溶 解，且不能被一般的蛋白酶水解，这给角蛋白的处理提出了难题。我国的角蛋白 资源极其丰富，它们大部分没有被充分利用，有的甚至造成环境污染。而近年来 畜牧业及氨基酸工业的大力发展使得蛋白资源极其紧缺，因此，当前应大力研究 最有效的处理方法使废弃的羽毛角蛋白直接转变成蛋白质或复合氨基酸，使之能 直接得到应用或作为进一步提纯氨基酸的廉价易得的原料，从而变废为宝，既保 护环境又资源利用，这将具有十分显著的经济效益和深远的社会效益。本课题针 对羽毛角蛋白废弃物的资源化利用，进行了以下的研究； 首先对从堆积腐烂羽毛的土壤中分离得到能高效降解羽毛角蛋白的细菌KI 进行形态观察和16S rI斟A测序。初步鉴定为寡养单胞菌(S跆刀D，唧办D肌D刀傩)， 与嗜麦芽窄食单胞菌(舭，zD抑厅D聊D刀傩辨口却翮仫)相似性达98％，命名为嗜麦芽 寡养单胞菌(．妣刀Df卸办D肌D嬲)降解羽毛角蛋白的相关报道。 通过对分离于长期堆积腐烂羽毛土壤中的嗜麦芽寡养单胞菌DHHJ s下，经 (S跆刀D肌p幻聊D以础聊讲，Dp．}zf，蛔DHHJ)进行紫外诱变，在最佳照射时间90 过一系列筛选方法，得到一株高效的突变菌株L4。该突变菌株接种于含有灭菌 处理过的完整羽毛的基础培养基中，发酵1天后即可见羽毛有明显脱落，发酵6 天后羽毛已经完全脱落，羽梗也有一定程度的毁解，降解率可达80％，比原始菌 株提高了20％。发酵液蛋白质含量最大可达7．05m舢，酶活力最大为8U／HlL， 氨基酸含量最大为O．19m咖L，这表明突变菌株L4具有较强降解羽毛角蛋白的能 力。 6．5～8．O，40℃以下酶活较稳 酶液最适作用pH为7．5，最适作用温度为40℃，在pH 7．肛8．0， 定。突变菌株L4粗酶液的最适作用pH为7．8，最适作用温度为50℃，在pH 60℃以下酶活较稳定。 认为嗜麦芽寡养单胞菌D删(。％蒯批脚口嬲删础啦以口DHⅢ)产生的角蛋 自酶应属于丝氨酸蛋自酶。对粗酶液进行了SDS—PAGE电泳，测定该角蛋自酶 可能为复合酶，由两个亚基构成，大小分别为14l姗和119l(D。 初步研究了嗜麦芽窄食单胞菌D掰{J艘秽黼细功D嚣瓣嚣甜磁础印磊蠢船DHHJ)降 解角蛋白的机理。电镜观察到细菌紧密地生长在羽枝上，在96h左右完全降解 羽毛。生物化学研究显示嗜麦芽窄食单胞菌DH圈《船捍。蹴罗是D掇绷甜嬲劫础溉窿 DHHJ)产生具有角蛋白降解能力的胞外酶。胞外酶的角蛋白水解活性(5．5U)受到 臆内二硫键还原酶的促进(16．3U)。但是，单独的角蛋自酶秘二硫键还暴酶在没 有活的细菌存在下，都不能降解羽毛。这说明细菌附着在降解过程中起了重要的 作用。这可能是女于细菌持续提供了一种还原刹破坏二硫键。此外，在羽毛降解 过程中，在胞外酶中还检测到亚硫酸盐，说明亚硫酸盐解对羽毛降解也起了一定 的作用。 固定化技术是提高生物催化利用率、生物反应速率以及实现高效连续生产过 程的有效方法。本课题研究了壳聚糖表面吸附法固定嗜麦芽窄食单胞菡 长，具有足够的韧性、强度和一定的生物相容性，易回收，降解效果稳定等特点， 因此是值得致力研究的方向。 提密了羽毛凳蛋自微生物水解的工艺，并借鉴垃圾堆肥和活性生物漓滤涟技 术，设计了羽毛水解装置。将经过加热预处理的羽毛作为“填料，放置于羽毛 反应器的孛段，让高效菌株在其中生长代谢，使无机培养液从装置顼部喷游至“填 料上，富含水溶蛋白的水解液从底部引出。羽毛沥滤床反应器的主要操作和效 能参数为：供气量毪00嘲，进水量O。5毛怂，循环量8L怒，转化率42％，产生可 溶蛋白5．469／L。 关键词：羽毛角蛋自嗜麦芽窄食单胞菌角蛋叁酶紫外诱变固定化壳聚糖水 解装置 ABSTRACT of Asencrusted